Мдоу 6 калинка: Муниципальное автономное образовательное учреждение Детский сад общеразвивающего вида №6 “Калинка”

Воспользуйтесь формой ниже, добавьте отзыв и станьте первыми

Форма добавления отзыва

Пожалуйста, оцените “Детский сад № 6 “Калинка””

Достоинства

Недостатки

Ваш отзыв добавлен в обработку. В ближайшее время он станет доступным для всех посетителей

Ваш отзыв уже добавлен на сайт. Напишите нам, если что-то указано неверно

Customer profile: МДОУ №6 “КАЛИНКА”

Основные сведения – Калинка-Клин

Основные сведения

МУНИЦИПАЛЬНОЕ ДОШКОЛЬНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ – ДЕТСКИЙ САД КОМБИНИРОВАННОГО ВИДА № 2 «КАЛИНКА» (МДОУ ДС № 2 «КАЛИНКА»)

Осуществляет образовательную деятельность по двум адресам:

1 отделение: 141612, Россия, Московская область, г. Клин, ул. К. Маркса , д 96 «А», контактный телефон 8 (496 24) 2 -02-16

2 отделение: 141612, Россия, Московская область, г. Клин, ул. 50 лет Октября, д 19 «А», контактный телефон 8 (496 24) 2 -50-10

e-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

Как нас найти:

От пос. 31 Октября, Клин-5 автобусы №№ 1,7, с пересадкой на 3,5,10,11

От 5 микрорайона автобусы №№ 5,14,17,18

От 10 поселка автобусы №№ 3,10,11

От Термометрового завода автобусы №№ 10,11

От пос. Майданово автобус № 6

Распространенность Mycoplasma genitalium и Mycoplasma hominis в урогенитальном тракте бразильских женщин Научно-исследовательский доклад на тему «Ветеринария»

Campos et al. BMC Infectious Diseases (2015) 15:60 DOI 10.1186 / s12879-015-0792-4

Инфекционные болезни

НАУЧНАЯ СТАТЬЯ Открытый доступ

Распространенность Mycoplasma genitalium и Mycoplasma hominis в урогенитальном тракте бразильских женщин

Гильерме Баррето Кампос1, Тасия Невес Лобао1, Натан Невес Селис2, Алин Тейшейра Аморим1, Хеллен Брага Мартинс2, Майса Сантос Барбоса2, Тиаго Энрике Кальдейра Оливейра2, Джанилсон Барбоса душ Сантуш3, Тиана Бакейру

Аннотация

Предыстория: роль Mycoplasma hominis и M.genitalium при инфекциях урогенитального тракта остается неизвестным. Кроме того, эти молликуты представляют собой сложную взаимосвязь с иммунным ответом хозяина. Роль воспалительных цитокинов в инфекциях также делает их хорошими кандидатами для исследования бактериального вагиноза и микоплазменных генитальных инфекций. Таким образом, целью данного исследования было обнаружение вышеупомянутых молликутов с помощью методологий количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР) в вагинальных мазках и дозировке цитокинов.

Методы. Влагалищные мазки и периферическая кровь были взяты у 302 женщин, включая здоровых людей.Молекулярные результаты коррелировали с некоторыми индивидуальными поведенческими переменными, клиническими и демографическими характеристиками, присутствием других важных микроорганизмов в вагинальных мазках и уровнями интерлейкина (IL) -ip и IL-6. Результаты. M. hominis и M. genitalium были обнаружены в 31,8% и 28,1% образцов соответственно. Результаты КПЦР были связаны с клиническими признаками и симптомами изучаемых инфекций. Частота Trichomonas vaginalis, Gardnerella vaginalis, Neisseria gonorrhoeae и Chlamydia trachomatis составила 3.0%, 21,5%, 42,4% и 1,7% соответственно. Повышенные уровни IL-1P были связаны с присутствием M. hominis и признаками и / или симптомами генитальной инфекции у исследованных женщин.

Заключение. Продукция IL-1P была связана с обнаружением M. hominis с помощью количественной ПЦР. Половое поведение исследуемых женщин было связано с обнаружением микоплазм и других возбудителей половых инфекций.

Ключевые слова: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, урогенитальная инфекция

Фон

Инфекции, передаваемые половым путем (ИППП), распространены во всем мире и являются важной проблемой общественного здравоохранения.В развивающихся странах ИППП входят в пятерку наиболее частых причин обращения за медицинской помощью. По оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), ежегодно происходит около 340 миллионов новых случаев ИППП. В Бразилии ежегодно регистрируется от десяти до двенадцати миллионов новых случаев [1,2].

* Для переписки: [email protected]

instituto de Ciencias Biomédicas, Departamento de Microbiologia, Universidade de Sao Paulo, Avenue Prof. Lineu Prestes n ° 1374 – Butanta, Sao Paulo, SP 05508-900, Brazil

2Instituto Multidisciplinar em Saúde, Universidade Federalda Bahia, Rua Rio de Contas, 58, Quadra 17, Lote 58 Bairro Candeias Vitória da Conquista, Bahia 45055-090, Brazil

Полный список информации об авторах доступен в конце статьи

Bio Med Central

В зависимости от возбудителя инфекции ИППП обычно выражается в поражении кожи, секрете, выделениях из влагалища, бородавках или волдырях.Молликуты относятся к ИППП, но также встречаются у здоровых людей. Однако пять десятилетий назад некоторые молликуты считались возбудителями урогенитального тракта человека [3]. Эта противоречивая история затрудняет выяснение роли этих бактерий. Взаимоотношения хозяин-патоген – сложный и изменчивый предмет, но некоторые изученные взаимодействия помогли лучше понять эту важную взаимосвязь [4].

M. hominis ассоциируется с негонококковым уретритом (НГУ), бактериальным вагинозом (БВ) и послеродовой лихорадкой [5] и редко с бактериемией, артритом [6], перитонитом [7] и менингитом [8] .В свою очередь M. genitalium был идентифицирован

© 2015 Campos et al .; лицензиат BioMed Central. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.Org/licenses/by/4.0), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что оригинальная работа правильно зачислен. Отказ Creative Commons Public Domain Dedication (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) распространяется на данные, представленные в этой статье, если не указано иное.

как возможный этиологический агент НГУ и нехламидийного уретрита [9]. Этот вид был обнаружен в образцах шейки матки от пациентов с сальпингитом и острым эндометритом [10]. Более того, M. genitalium тесно связана с цервицитом [11]. У женщин может отмечаться увеличение количества выделений из влагалища, а также дизурия, но инфекция может протекать бессимптомно [12].

Упомянутые выше молликуты также представляют собой сложную взаимосвязь в иммунном ответе хозяина [13].Хорошо известно, что воспалительные цитокины играют решающую роль в регуляции реакции на инфекции. Фактически, эти уровни цитокинов были связаны с присутствием микоплазм. Это делает их хорошими кандидатами для изучения при развитии БВ и микоплазменных инфекций [14].

Хотя большинство генитальных микоплазм культивируют в определенных питательных средах, M. genitalium весьма требователен. ПЦР-анализы для обнаружения этого молликута в клинических образцах помогают лучше понять его частоту и распространение.В последние годы ПЦР стала легкодоступным и надежным методом обнаружения молликутов в половых путях человека [15]. Таким образом, целью этого исследования было обнаружение M. hominis и M. genitalium и измерение провоспалительных цитокинов в группе женщин с или без генитальных признаков и / или симптомов генитальной инфекции. Женщины учились жить в Витории-да-Конкиста, городе, расположенном в штате Баия, Бразилия.

Результаты

M. hominis и M.L. Среднее количество обоих видов в образцах мазков было выше у женщин с признаками инфекции или симптомов, чем в контрольной группе. Однако при использовании критерия Манна-Уитни статистической разницы не наблюдалось.

Клинические образцы также были протестированы с помощью стандартной ПЦР на другие микроорганизмы. T. vaginalis, N. gonorrhoeae, G. vaginalis и C. trachomatis были обнаружены в 3,0%, 21,5%, 42,4% и 1,7% образцов соответственно. В таблице 1 приведены сопутствующие инфекции, обнаруженные микоплазмами и другими видами, имеющими гинекологическое значение.

M. hominis и M genitalium, обнаруженные с помощью количественной ПЦР с использованием одномерного анализа, показали, что женщины в возрасте до 25 лет представляют более высокий риск заражения M. hominis (p = 0,034) [см. Дополнительный файл 1], в то время как женщины, проживающие в сельских регионах (p <0,001), которые обращались за консультацией по симптоматическим причинам (p <0,017), имели одного или нескольких сексуальных партнеров в течение последних трех месяцев (p = 0,039), сообщили о зуде (p = 0,007) и имели выделения из влагалища (p = 0. 006),

Таблица 1 Коинфекция генитальных микроорганизмов в образцах влагалища женщин из Витория-да-Конкиста, Бразилия

Микроорганизмы n (%)

MG + MH 15 (4.97)

MG + GV 12 (3,97)

MG + CT 1 (0,33)

MG + NG 4 (1,32)

MG + MH + GV 6 (1,99)

MG + MH + NG 8 (2.65)

MG + MH + TV 1 (0,33)

MG + NG + GV 1 (0,33)

MG + MH + NG + GV 4 (1,32)

MG + MH + GV + TV 1 (0,33)

MH + GV 21 (6,95)

MH + NG 4 (1.32)

MH + TV 1 (0,33)

MH + NG + GV 14 (4,63)

MH + GV + CT 1 (0,33)

МЗ + ТВ + ГВ 1 (0,33)

MH + TV + NG + GV 1 (0,33)

ГВ + ТТ 2 (0,66)

НГ + ГВ 17 (5,62)

Общее количество женщин с коинфекцией 115 (38,08)

MG = Mycoplasma genitalium, MH = Mycoplasma hominis, GV = Gardnerella vaginalis, NG = Neisseria gonorrhoeae, CT = Chlamydia trachomatis, TV = Trichomonas vaginalis.N = 302 (абсолютное количество протестированных образцов). Основные выявленные сопутствующие инфекции выделены жирным шрифтом.

представляет более высокий риск заражения M. genitalium [см. Дополнительный файл 1].

Используя многомерный анализ, риск заражения M. hominis связан с клиническими посещениями в связи с симптомами, годами образования (<12 лет), возрастом первого полового акта (<15 лет), сексуальной активностью, возрастом (<25 лет) и раса / окрас (черный / коричневый / коренной) [см. дополнительный файл 1].Для инфекции M. genitalium наивысший риск был связан с регионом проживания, количеством половых партнеров за последние три месяца, наличием признаков и / или симптомов, указывающих на ИППП, а также выделениями и зудом в области гениталий [см. Дополнительный файл 1].

Уровни цитокинов сравнивали у женщин с положительной и отрицательной КПЦР на M. hominis. У женщин с ДНК M. hominis средний уровень интерлейкина (IL) -1 | 3 был выше, чем у женщин без M. hominis (p = 0,047) (рис. 1A). Однако уровни IL-6 не показали статистической разницы между инфицированными и неинфицированными женщинами (p = 0.326) (Рисунок 1B). Кроме того, статистическая разница не наблюдалась ни для IL-1P (p = 0,407), ни для уровней IL-6 (p = 0,332) (рис. 1C и 1D) при сравнении групп случая и контрольной группы qPCR-положительных для M. hominis.

Рисунок 1 Количественное определение IL-1 p и IL-6 (пг / мл) с помощью ELISA в образцах плазмы. (A) Концентрация IL-1 p (пг / мл) в плазме групп женщин с положительной и отрицательной КПЦР на M. hominis; (B) Концентрация ИЛ-6 (пг / мл) в плазме женщин групп qPCR положительных и отрицательных для M.hominis (C) Концентрация IL-1 p (пг / мл) в плазме женщин с положительным результатом кПЦР на M. hominis из случайной и контрольной групп (D) Концентрация IL-6 (пг / мл) в плазме женщин кПЦР на M. hominis -положительные от кейсов и контрольных групп. (E) Концентрация IL-1 p (пг / мл) в плазме групп женщин с положительной и отрицательной КПЦР на M. genitalium; (F) Концентрация IL-6 (пг / мл) в плазме групп женщин с положительной и отрицательной КПЦР на M. genitalium (G) Концентрация IL-1 p (пг / мл) в плазме женщин M.genitalium КПЦР-положительный результат из случайной и контрольной групп (H) Концентрация ИЛ-6 (пг / мл) в плазме женщин, положительных по результатам КПЦР M. genitalium из клинической и контрольной групп. Стандартное отклонение и среднее значение обозначены на графике сплошными линиями. Статистический анализ Манна Уитни. * р <0,05; ** р <0,01.

Женщины с M. genitalium, иначе представили уровни IL-6 ниже, чем в группе qPCR-отрицательных для этого моллюта (p = 0,004) (рис. 1E). Уровни IL-1 | 3 в сравнении между теми же двумя группами женщин не показали статистической разницы (p = 0.833) (Рисунок 1F). Сравнение уровней цитокинов между больными и контрольными группами. QPCR-положительная для M. genitalium также не показала статистической разницы в уровнях IL-1 | 3 (p = 0,747) и IL-6 (p = 0,858) (рис. 1G и 1H). .

Обсуждение

В настоящем исследовании частота M. hominis среди исследованных женщин составила 31,8% с помощью КПЦР. До сих пор нет единого мнения относительно роли обнаруженного M. hominis, хотя M. hominis был изолирован от урогенитальных инфекций.Однако наличие M. hominis (MH) коррелировало с развитием воспаления тазовых органов, самопроизвольных абортов и бесплодия [16]. Несмотря на отсутствие статистической значимости, средняя нагрузка ЗГ была выше у женщин с признаками и / или симптомами, чем без этого состояния. Вероятно, бактериальная нагрузка тесно связана с развитием болезни. В нескольких исследованиях сообщалось об обнаружении ЗГ с помощью количественной ПЦР. Baczynska et al. [17] наблюдали присутствие MH с помощью qPCR только у 2.4% образцов шейки матки женщин, посещающих клиники репродуктивной медицины в Дании. По словам авторов, результаты были аналогичными при сравнении с результатами культивирования. Аналогичным образом, Cunningham et al. [18] получили положительные результаты на ЗГ с помощью кПЦР в 14% мочеполовых проб (вагинальные мазки и моча) в США. Большинство исследований сосредоточено на традиционном ПЦР-анализе [19]. На юго-востоке Бразилии Rodrigues et al. [20], в исследовании мазков из шейки матки у 224 женщин, посетивших три клиники женского здоровья, сообщили о ЗГ у 21.9% проб.

В настоящем исследовании мы обнаружили, что первый половой акт в возрасте до 15 лет и в возрасте до 25 лет были связаны с риском заражения ЗГ. Аналогичные результаты были получены Kataoka et al. [21], которые проанализировали 877 образцов вагинальных мазков в Японии, и Verteramo et al. [22], которые проанализировали рискованное поведение женщин, инфицированных ЗГ. Никакой связи с другими маркерами ИППП не наблюдалось. Однако исследование, проведенное с участием 153 греческих женщин, показало сильную связь ЗГ с БВ, мочевыми симптомами (например,грамм. необъяснимое хроническое мочеиспускание, дизурия и уретрит) и активная сексуальная активность [23]. Кроме того, в литературе также сообщалось о других положительных ассоциациях, таких как коинфекция C. trachomatis [21], сопутствующие инфекции G. vaginalis, T. vaginalis и U. urealyticum [24], аборты [22], использование презервативов, раса или несколько половых партнеров [24].

M. genitalium (MG) признан этиологическим агентом НГУ у мужчин, тогда как у женщин он признан этиологическим агентом воспаления шейки матки, бесплодия и воспалительных заболеваний органов малого таза.Распространенность 28,1%

(85/302) был обнаружен в этом исследовании с помощью количественной ПЦР. Обычно распространенность MG считается низкой. Falk et al. [25], используя образцы мочи и шейки матки женщин, посещающих клинику для лечения ЗППП для женщин в Оребро, Швеция, сообщили о частоте 6%. Уокер и др. [26], в когортном исследовании с участием австралийских женщин от 16 до 25 лет, набранных из клиник первичной медико-санитарной помощи, также наблюдали низкую частоту MG (2,4%). В Бразилии Rodrigues et al. [20] сообщили о частоте только 0.9%. Однако Casin et al. [27] наблюдали высокую распространенность MG у женщин, посещающих клинику по лечению болезней, передающихся половым путем, в Париже. Кроме того, MG чаще выделялся из эпителиальных клеток влагалища (39%), чем из шейки матки (21%). Аналогичные результаты у женщин, посещающих клиники по лечению заболеваний, передающихся половым путем, также наблюдались Gaydos et al. [28] и Mobley et al. [29], которые сообщили о распространенности 19,2%. Кроме того, Mobley et al. [29] также обнаружили более высокую распространенность MG в вагинальных образцах.По мнению авторов, это может отражать минимальный иммунный ответ хозяина на инфекцию MG в эпителии влагалища и, следовательно, большую выживаемость бактерий во влагалище по сравнению с эндоцервиксом, где воспалительный ответ на MG со стороны эндоцервикальных эпителиальных клеток более выражен. крепкий. При этом нагрузка MG в исследуемых образцах также была выше у женщин с симптомами, чем у женщин без симптомов. Однако в обеих группах не было значимой статистической разницы. Среди обследованных женщин с признаками и симптомами ИППП 32.2% были положительными при кПЦР на MG; связь между этими двумя событиями была статистически значимой (p = 0,004) (данные не показаны).

В настоящем исследовании несколько факторов риска микоплазменной инфекции были проанализированы в исследованиях с использованием логистической регрессии. Самый высокий риск был связан с бразильским регионом проживания, количеством сексуальных партнеров за последние три месяца, наличием признаков и / или симптомов, указывающих на ИППП, включая жидкие выделения и зуд в области гениталий. Риск инфицирования MG, связанный с возрастом женщин, варьируется в литературе.В соответствии с настоящим исследованием Huppert et al. [30] и Kataoka et al. [21] также не наблюдали связи между возрастами женщин. Никаких упоминаний о положительной связи между признаками и симптомами и инфекцией MG в других исследованиях не наблюдалось. Напротив, сообщалось об отрицательной связи симптомов дизурии [29]. Кроме того, в литературе описаны следующие факторы риска урогенитальной инфекции MG у женщин, в том числе: недавний половой контакт [30], преждевременные роды [31], количество половых партнеров за последний месяц, курение, интимная гигиена с душ и самопроизвольный аборт в анамнезе [32].Коинфекция C. trachomatis и T. vaginalis [31] также рассматривалась как факторы риска инфицирования MG.

Выявленные частоты T. vaginalis, N. gonor-rhoeae, G. vaginalis и C. trachomatis у женщин

: 3,0%, 21,5%, 42,4% и 1,7% соответственно. Разница в распространенности микоплазм и исследуемых микроорганизмов и факторов риска по сравнению с литературой может быть связана с исследуемой популяцией. Некоторые авторы подтверждают, что преобладание половых микроорганизмов связано с региональными различиями [1,27,28,33-35].Однако объяснения этих различий неясны, вариативны и требуют дополнительного изучения. Исследуемые женщины проживают в северо-восточном регионе Бразилии с полузасушливым климатом и высоким уровнем бедности. Это население строго зависит от основных государственных медицинских услуг. На момент сбора клинического материала медицинская служба для женщин несколько месяцев не работала. Мы полагаем, что этот фактор, связанный с отсутствием знаний о профилактике и лечении ИППП, мог способствовать полученной распространенности.

Кроме того, примерно тридцать восемь процентов женщин показали колонизацию более чем одним микроорганизмом. Наиболее частыми коинфекциями были M. hominis и G. vaginalis (6,95%). Эти два микроорганизма считаются комменсалом половых путей [36]. Лели и др. [37] наблюдали, что пациенты с положительным результатом на M. hominis чаще колонизировались G. vaginalis. Коинфекция G. vaginalis и N. gonorrheae (5,62%), M. genitalium и M. hominis (4,97%), M.hominis, N. gonorrheae и G. vaginalis (4,63%), а также M. genitalium и G. vaginalis (3,97%). Часто сообщается о коинфекции среди половых микроорганизмов [20,26,28,29,38,39]. По данным Gaydos et al. [28], эти результаты имеют важное значение для диагностики и лечения генитальных инфекций. В Бразилии нет руководств по лечению микоплазм половых органов. Используемые антибиотики не стандартизированы и могут быть эффективны не во всех случаях M. genitalium или M.hominis инфекция.

Условно-патогенная роль молликутов включает некоторые особенности врожденного иммунного ответа. В настоящем исследовании у инфицированных женщин наблюдали более высокий уровень IL-1 | 3, чем у неинфицированных MH, но не наблюдали разницы в уровнях IL-6. В литературе присутствие ЗГ было связано с более высокими уровнями вагинального IL-1 | 3, но не с уровнями антагониста рецепторов вагинального интерлейкина-1 (IL-1ra) и уровнями IL-1 | 3, IL в амниотической жидкости. -1ra и Ил-6 [40].Согласно Wasiela et al. [41], вагинальные уровни IL-8, но не IL-1a, IL-1 | 3 или IL-6, выше у женщин с микоплазменной инфекцией. Ryckman et al. [14] наблюдали, что вагинальные уровни IL-1 | 3, IL-6 и IL-8 у беременных были значительно выше у женщин с любой микоплазмой по сравнению с женщинами без нее. Это может быть связано с молекулярным паттерном, связанным с бактериальным патогеном (PAMPS). Молликуты обладают большим количеством липопротеинов, называемых липид-ассоциированными мембранными белками (LAMP). Распознавание LAMP системой врожденного иммунитета может запускать производство различных

провоспалительных цитокинов из множества клеток, поверхностный компонент, вызывающий воспаление [42-44].Следовательно, можно сделать вывод, что иммунный ответ на молликутов варьирует из-за хозяина, антигенной мозаики и вариабельности молликутов. Это может частично объяснить потенциальную роль Mollicutes у млекопитающих как превосходных условно-патогенных микроорганизмов, которые по-разному модулируют иммунный ответ.

У женщин, инфицированных MG, средние уровни IL-6 были ниже, чем в группе qPCR-отрицательных. Эти данные можно объяснить низкой нагрузкой M. genitalium или хронической инфекцией.Фактически, IL-6 вырабатывается в основном в острой фазе воспаления во влагалище [45]. McGowin et al. [46] обнаружили, что MG индуцирует IL-6 в клетках A2EN и ShEN101 человека во время острой секреции (48 ч). Однако при персистирующей инфекции продолжительностью 36 дней был обнаружен отмеченный, но незначительный уровень ИЛ-6. Кроме того, концентрации интерлейкина в плазме могут быть ниже, несмотря на присутствие этого микроорганизма.

Выводы

Это исследование также способствовало получению эпидемиологических данных по ИППП в географическом регионе, выбранном для местного общественного здравоохранения, особенно потому, что большинство ИППП в Бразилии не подлежат регистрации.Из-за сложности микробиоты влагалища и ограниченного понимания ее роли в урогенитальных заболеваниях необходимы дальнейшие исследования молликутов, чтобы лучше понять роль этих бактерий в урогенитальном тракте женщин.

Методы

Ученых женщин

В этом поперечном аналитическом исследовании были проанализированы клинические образцы из города Витория-да-Конкиста, третьего по величине города штата Баия на северо-востоке Бразилии.Женщины, включенные в исследование, посещали бразильскую клинику общественного здравоохранения, известную как «Единая система здравоохранения». Исследуемая популяция состояла из 302 женщин в возрасте от 14 до 78 лет, в среднем 37 лет. Были получены клинические образцы (мазок из влагалища и периферическая кровь). Каждой женщине был задан ряд вопросов, и их ответы были записаны. Критериями исключения были беременность, наличие ВИЧ-инфекции и антимикробная терапия в течение последних 3 месяцев. Учитывались клинические признаки и симптомы, такие как выделения, зуд, зловонный запах и дизурия.Кроме того, информация о сексуальном опыте и поведении была собрана в ходе интервью с обученным персоналом, чтобы свести к минимуму искажение информации.

Заявление о соблюдении этических норм

Протокол исследования был одобрен Комитетом по этике исследований Института биомедицинских наук Университета Сан-Паулу (998/2012). Перед участием в исследовании испытуемые предоставили письменное информированное согласие

Клинические образцы

Пробы собраны с мая по июль 2011 г. и январь 2012 г.Мазками натирали внутреннюю поверхность влагалища. Образцы хранили при 4 ° C в 5 мл транспортной среды. Образцы крови собирали в две пробирки объемом 5 мл с этилендиаминтетуксусной кислотой (EDTA) и без нее, и сыворотку хранили при -20 ° C для анализа с помощью иммуноферментного сорбента (ELISA). Образцы влагалища гомогенизировали и хранили при -20 ° C для выделения ДНК.

Количественная ПЦР (qPCR)

Образцы геномной ДНК из вагинальных мазков были получены в соответствии с рекомендациями Purelink ™ Genomic DNA Mini Kit (Invitrogen, Sao Paulo, SP, Brazil).ПЦР в реальном времени выполняли в двух экземплярах для каждого образца. Протокол амплификации ДНК был выполнен с помощью зонда TaqMan для M. hominis [47] и M. genitalium [48]. Для создания стандартов ДНК для абсолютного количественного определения микоплазмы сначала культивировали в 2 мл при 37 ° C и увеличивали до 50 мл бульона SP4. В фазе логарифмического роста (на основе колориметрических изменений) культуру центрифугировали при 20 600 g в течение 30 минут при 25 ° C. ДНК экстрагировали с использованием мини-набора PureLink ™ Genomic DNA Mini Kit.l) стандарта ДНК микоплазмы были приготовлены и проанализированы.

Стандартная дифференциальная ПЦР также была проведена для обнаружения G. vaginalis [49], T. vaginalis [50], N. gonorrhoeae и C. trachomatis [51].

Количественное определение цитокинов

Набор для ELISA (Bioscience, Сан-Диего, С. А., США) и 96-луночные микропланшеты с высокой абсорбцией использовали для количественного определения цитокинов. После стандартизации кривой и образца объема 100 мкл каждой сыворотки использовали для количественного определения цитокинов IL-1β и IL-6.Иммуноферментные реакции измеряли с помощью ELISA с длиной волны 450 нм.

Статистический анализ

Полученные клинические и эпидемиологические данные анализировали с помощью программы SPSS 16.0 (SPSS Inc., Чикаго, США). Связь между переменными сравнивалась с использованием критерия Пирсона хи-квадрат или точного критерия Фишера. Статистическая значимость считалась p <0,05 с 95% доверительным интервалом. Факторы риска, связанные с инфекцией, оценивали с помощью отношения шансов (OR) и одномерного анализа.Все переменные с p <0,10 были включены в многомерный анализ с использованием логистической регрессии. Для оценки независимого вклада переменных, связанных с обнаружением

микроорганизмов. Для анализа данных количественного определения цитокинов использовали программу GraphPad Prism. При оценке двух групп использовался непараметрический критерий Манна-Уитни.

Дополнительный файл

Дополнительный файл 1: Однофакторный и многомерный анализ возможных факторов риска Mycoplasma hominis и M.genitalium инфекции у женщин из Витория-да-Конкиста, Бразилия, 2011 г.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов. Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: GBC, TNL, LMM и JT. Проведены эксперименты: GBC, TNL, NNS, LMM, ATA, HBM, MSB и THCO. Проанализированы данные: GBC, TNL, DSB, TBF, LMM и JT. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: ATA, GBC, TNL, DSB, TBF, LMM и JT.Написал статью: GBC, LMM, DSB, TBF и JT. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Благодарности

Это исследование было поддержано Fundagäo de Amparo a Pesquisa do Estado de Säo Paulo (2011 / 10138-4). Мы благодарим Арисельму П. Франга за неоценимую техническую помощь, доктора Хорхе Сампайо, ассоциированного исследователя Института Флери / Сан-Паулу, Бразилия, за любезно предоставленные образцы бактерий и AcademicEnglish Solutions.com за пересмотр английского языка.

Сведения об авторе

11nstituto de Ciencias Biomédicas, Departamento de Microbiologia, Universidade de Säo Paulo, Avenue Prof. Lineu Prestes n ° 1374 – Butantä, Säo Paulo, SP 05508-900, Бразилия. 2Instituto Multidisciplinar em Saúde, Universidade Federal da Bahia, Rua Rio de Contas, 58, Quadra 17, Lote 58 Bairro Candeias Vitória da Conquista, Bahia 45055-090, Brazil. 3Centro de Ciencias da Saúde, Федеральный университет до Реконкаво Баяно, Av. Карлос Амарал, 1015 – Кахуэйро, Санто-Антонио-де-Хесус, BA CEP: 44.570-000, Бразилия.

Получено: 11 сентября 2014 г. Принято: 30 января 2015 г. Опубликовано онлайн: 14 февраля 2015 г.

Список литературы

1. Накашима К., Шигехара К., Кавагути С., Вакацуки А., Кобори Ю., Накашима К. и др. Распространенность инфекции вируса папилломы человека в ротоглотке и моче среди сексуально активных мужчин: сравнительное исследование инфекции вирусом папилломы и другими микроорганизмами, включая Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma spp., и Ureaplasma spp. BMC Infect Dis. 2014; 14: 43.

2. Тун В., де Мелло М., Пинхо А., Чинаглиа М., Диас Дж. Рискованное сексуальное поведение и распространенность ВИЧ среди мужчин секс-бизнеса, практикующих секс с мужчинами, и лиц, не занимающихся секс-работой, в Кампинасе, Бразилия. SexTransm Infect. 2008; 84 (6): 455-7.

3. Краузе, округ Колумбия, Лейт, Д.К., Уилсон, Р.М., Бейсман, Дж. Б.. Идентификация белков Mycoplasma pneumoniae, связанных с гемадсорбцией и вирулентностью. Infect Immun. 1982; 35 (3): 809-17.

4. Чернов В.М., Чернова О.А., Баранова Н.Б., Горшков О.В., Медведева Е.С., Шаймарданова Г.Ф. Адаптация микоплазм к стрессовым условиям: особенности протеомного сдвига у Mycoplasma hominis PG37 при голодании и низкой температуре. Mol Biol. 2011; 45 (5): 914-23.

5. Кох А., Билина А., Теодорович Л., Старый А. Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum у пациентов с венерическими заболеваниями. Wien Klin Wochenschr. 1997; 109 (14-15): 584-9.

6. Поджио Т.В., Орландо Н., Галантерник Л., Гринштейн С. Микробиология острых артропатий у детей в Аргентине: Mycoplasma pneumoniae и hominis и Ureaplasma urealyticum. Pediatr Infect Dis J. 1998; 17 (4): 304-8.

7. Миеттинен А. Mycoplasma hominis у пациентов с воспалительными заболеваниями органов малого таза. Isr J Med Sci. 1987; 23 (6): 713-6.

8. Wolthers KC, Kornelisse RF, Platenkamp GJ, Schuurman-Van Der Lem MI, van der Schee C, Hartwig NG, et al.Случай Mycoplasma hominis

Менингоэнцефалит у доношенного ребенка: быстрое выздоровление после начала лечения ципрофлоксацином. Eur J Pediatr. 2003; 162 (7-8): 514-6.

9. Уно М., Дегучи Т., Комеда Х., Хаясаки М., Лида М., Нагатани М. и др. Mycoplasma genitalium в шейках японок. Sex Transm Dis. 1997; 24 (5): 284-6.

10. Коэн Ч. Р., Манхарт Л. Е., Букуси Э. А., Астете С., Брунхэм Р. К., Холмс К. К. и др. Связь между Mycoplasma genitalium и острым эндометритом.Ланцет. 2002; 359 (9308): 765-6.

11. Jensen JS. Mycoplasma genitalium: этиологический агент уретрита и других заболеваний, передающихся половым путем. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2004; 18 (1): 1-11.

12. Haggerty CL, Taylor BD. Mycoplasma genitalium: новая причина воспалительных заболеваний органов малого таза. Заражение Dis Obstet Gynecol. 2011; 2011: 959816.

13. Бейсмен Дж. Б., Талли Дж. Дж. Микоплазмы: сложные, возрождающиеся и отягощенные своей дурной славой.Emerg Infect Dis. 1997; 3 (1): 21-32.

14. Рикман К.К., Уильямс С.М., Калинка Дж. Корреляции отдельных уровней вагинальных цитокинов с признаками беременности у женщин с бактериальным вагинозом и микоплазмами. J Reprod Immunol. 2008; 78 (2): 172-80.

15. Patel MA, Nyirjesy P. Роль видов микоплазм и уреаплазм в инфекциях нижних половых путей у женщин. Curr Infect Dis Rep.2010; 12 (6): 417-22.

16. Мишу И.В., Константулакис П., Макарунис К., Георгулиас Г., Капетаниос В., Циливакос В.Молекулярное исследование менструальной ткани на наличие Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis, собранных женщинами с бесплодием в анамнезе. J Obstet Gynaecol Res. 2014; 40 (1): 237-42.

17. Бачинска А., Свенструп Х. Ф., Феддер Дж., Биркелунд С., Кристиансен Г. Разработка ПЦР в реальном времени для обнаружения Mycoplasma hominis. BMC Microbiol. 2004; 4: 35.

18. Каннингем С.А., Мандрекар Дж., Розенблатт Дж. Э., Патель Р.Быстрая ПЦР-детекция Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и Ureaplasma parvum. Int J Bacteriol. 2013; 41 (5): 1850-5.

19. Маэда С., Дегучи Т., Исико Х., Мацумото Т., Наито С., Кумон Х. и др. Обнаружение Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum (биовар 1) и Ureaplasma urealyticum (биовар 2) у пациентов с негонококковым уретритом с использованием гибридизации полимеразной цепной реакции с микротитровальным планшетом. Int J Urol. 2004; 11 (9): 750-4.

20.Родригес MM, Фернандес PA, Haddad JP, Paiva MC, Souza Mdo C, Andrade TC и др. Частота видов Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis и Ureaplasma в образцах шейки матки. J Obstet Gynaecol. 2011; 31 (3): 237-41.

21. Катаока С., Ямада Т., Чоу К., Нисида Р., Морикава М., Минами М. и др. Связь между преждевременными родами и колонизацией влагалища микоплазмами на ранних сроках беременности. J Clin Microbiol. 2006; 44 (1): 51-5.

22.Verteramo R, Patella A, Calzolari E, Recine N, Marcone V, Osborn J и др. Эпидемиологическое исследование Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum у гинекологических амбулаторных больных, Рим. Италия, эпидемиологическая инфекция. 2013; 141 (12): 2650-7.

23. Бака С., Кускуни Э., Антонопулу С., Сиутис Д., Папаконстантину М., Хассиакос Д. и др. Распространенность Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis у женщин с хроническими симптомами мочеиспускания. Урология. 2009; 74 (1): 62-6.

24.Newton ER, Piper JM, Shain RN, Perdue ST, Peairs W. Предсказатели микрофлоры влагалища. Am J Obstet Gynecol. 2001; 184 (5): 845-53. обсуждение 853-845.

25. Фальк Л., Фредлунд Х., Дженсен Дж. С.. Признаки и симптомы уретрита и цервицита у женщин с инфекциями Mycoplasma genitalium или Chlamydia trachomatis или без них. Половая трансмиссия. 2005; 81 (1): 73-8.

26. Уокер Дж., Фэрли К.К., Брэдшоу С.С., Тебризи С.Н., Чен М.Ю., Твин Дж. И др. Разница в детерминантах Chlamydia trachomatis и Mycoplasma genitalium в выборке молодых австралийских женщин.BMC Infect Dis. 2011; 11:35.

27. Casin I, Vexiau-Robert D, De La Salmoniere P, Eche A, Grandry B, Janier M. Высокая распространенность Mycoplasma genitalium в нижних отделах мочеполовых путей у женщин, посещающих клинику по лечению заболеваний, передающихся половым путем, в Париже, Франция. Sex Transm Dis. 2002; 29 (6): 353-9.

28. Гайдос К., Малдейс Н. Э., Хардик А., Хардик Дж., Куинн ТК. Mycoplasma genitalium как причина множественной этиологии цервицита у женщин, посещающих клиники по лечению заболеваний, передающихся половым путем.Sex Transm Dis. 2009; 36 (10): 598-606.

29. Мобли В.Л., Хоббс М.М., Лау К., Вайнбаум Б.С., Гетман Д.К., Сена А.С. Инфекция Mycoplasma genitalium у женщин, посещающих половые органы

Клиника передаваемых инфекций: тип диагностического образца, коинфекции и предикторы. Sex Transm Dis. 2012; 39 (9): 706-9.

30. Huppert JS, Mortensen JE, Reed JL, Kahn JA, Rich KD, Hobbs MM. Mycoplasma genitalium, обнаруженная с помощью транскрипционной амплификации, ассоциирована с Chlamydia trachomatis у женщин-подростков.Sex Transm Dis. 2008; 35 (3): 250-4.

31. Хитти Дж., Гарсия П., Тоттен П., Пол К., Астете С., Холмс К.К. Корреляты шейки матки Mycoplasma genitalium и риск преждевременных родов среди перуанских женщин. Sex Transm Dis. 2010; 37 (2): 81-5.

32. Манхарт Л.Е., Кричлоу К.В., Холмс К.К., Дутро С.М., Эшенбах Д.А., Стивенс К.Э. и др. Слизисто-гнойный цервицит и Mycoplasma genitalium. J Infect Dis. 2003; 187 (4): 650-7.

33. Lazenby GB, Taylor PT, Badman BS, McHaki E, Korte JE, Soper DE, et al.Связь между Trichomonas vaginalis и вирусом папилломы человека высокого риска у сельских женщин Танзании, проходящих скрининг на рак шейки матки. Clin Ther. 2014; 36 (1): 38-45.

34. Гай Р., Уорд Дж., Палочка Н, Рамболд А., Гартон Л., Хенгель Б. и др. Коинфекция с Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae и Trichomonas vaginalis: перекрестный анализ положительности и факторов риска в отдаленных общинах австралийских аборигенов. Sex Transm Dis. 2014.

35.Fastring DR, Amedee A, Gatski M, Clark RA, Mena LA, Levison J, et al. Совместное возникновение Trichomonas vaginalis и бактериального вагиноза и вагинального выделения РНК ВИЧ-1. Sex Transm Dis. 2014; 41 (3): 173-9.

36. Marrazzo JM. Возникающие проблемы в понимании и лечении бактериального вагиноза. Expert Rev Anti-Infect Ther. 2004; 2 (6): 913-22.

37. Лели С., Меуччи М., Венто С., Д’Ало Ф., Фаринелли С., Перито С. и др. Микробные и вагинальные детерминанты, влияющие на колонизацию гениталий Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в популяции пациенток.Infez Med. 2013; 21 (3): 201-6.

38. Гайдос К., Малдейс Н. Э., Хардик А., Хардик Дж., Куинн ТК. Mycoplasma genitalium в сравнении с хламидиозом, гонореей и трихомонадой как этиологический агент уретрита у мужчин, посещающих клиники ЗППП. Половая трансмиссия. 2009; 85 (6): 438-40.

39. Моллер Б.Р., Мард П.А., Аронс С., Нусслер Э. Инфекция Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Neisseria gonorrhoeae у пациентов с острым воспалительным заболеванием тазовых органов.Sex Transm Dis. 1981; 8 (3): 198-202.

40. Дох К., Бартон П.Т., Корнеева И., Перни С.К., Бонджованни А.М., Таттл С.Л. и др. Дифференциальная вагинальная экспрессия цитокинов системы интерлейкина-1 в присутствии Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum у беременных. Заражение Dis Obstet Gynecol. 2004; 12 (2): 79-85.

41. Васиела М., Кжемински З., Калинка Дж., Бжезинская-Блащик Э. Корреляция между уровнями выбранных цитокинов в шейно-вагинальной жидкости женщин с аномальной бактериальной флорой влагалища.Medycyna doswiadczalna i mikrobiologia. 2005; 57 (3): 327-33.

42. Гарсия Дж., Лемерсье Б., Роман-Роман С., Равади Г. Синтетический липопептид, полученный из Mycoplasma fermentans, индуцирует активность AP-1 и NF-kappaB и секрецию цитокинов в макрофагах посредством активации митоген-активируемых протеинкиназных путей. J Biol Chem. 1998; 273 (51): 34391-8.

43. Кацеровский М., Селек П., Влкова Б., Скогстранд К., Хоугард Д.М., Кобо Т. и др. Профили белков амниотической жидкости при интраамниотическом воспалительном ответе на Ureaplasma spp.и другие бактерии. PLoS One. 2013; 8 (3): e60399.

44. Viscardi RM. Виды уреаплазмы: роль в неонатальных заболеваемости и исходах. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 2014; 99 (1): F87-92.

45. Тейлор Б.Д., Хольцман С.Б., Фичорова Р.Н., Тиан Й., Джонс Н.М., Фу В. и др. Биомаркеры воспаления во влагалищной жидкости и преждевременные роды. Hum Reprod. 2013; 28 (4): 942-52.

46. McGowin CL, Annan RS, Quayle AJ, Greene SJ, Ma L, Mancuso MM, et al.Стойкая инфекция Mycoplasma genitalium эндоцервикальных эпителиальных клеток человека вызывает хроническую воспалительную секрецию цитокинов. Infect Immun. 2012; 80 (11): 3842-9.

47. Ферандон С., Пичан О, Янис С., Бенар А., Ренодин Н., Перейр С. и др. Разработка ПЦР в реальном времени, нацеленного на ген yidC, для обнаружения Mycoplasma hominis и сравнения с количественной культурой. Clin Microbiol Infect. 2011; 17 (2): 155-9.

48. Olsen B, Lan PT, Stalsby Lundborg C, Khang TH, Unemo M.Оценка населения Mycoplasma genitalium во Вьетнаме – низкая распространенность среди замужних женщин репродуктивного возраста в сельской местности. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2009; 23 (5): 533-7.

49. Зариффард М.Р., Сайфуддин М., Ша БЭ, Копье Г.Т. Обнаружение микроорганизмов, связанных с бактериальным вагинозом, с помощью ПЦР в реальном времени на Lactobacilli, Gardnerella vaginalis и Mycoplasma hominis. FEMS Immunol Med Microbiol. 2002; 34 (4): 277-81.

50. Райли Д.Е., Робертс М.С., Такаяма Т., Кригер Дж. Н..Разработка диагностики Trichomonas vaginalis на основе полимеразной цепной реакции. J Clin Microbiol. 1992; 30 (2): 465-72.

51. Махони Дж. Б., Луинстра К. Э., Тиндалл М., Селлорс Дж. В., Крепель Дж., Чернески М. Мультиплексная ПЦР для обнаружения Chlamydia trachomatis и Neisseria gonorrhoeae в образцах из мочеполовой системы. J Clin Microbiol. 1995; 33 (11): 3049-53.

Отправьте следующую рукопись в BioMed Central и воспользуйтесь всеми преимуществами:

• Удобная онлайн-подача

• Тщательная экспертная оценка

• Отсутствие ограниченного пространства или платы за цветные рисунки

• Немедленная публикация о приемке

• Включение в PubMed, CAS, Scopus и Google Scholar

• Исследование, свободно распространяемое

Отправьте рукопись на Tpntral

www.biomedcentral.com/submit> _ciiuai

Распространенность Mycoplasma genitalium и Mycoplasma hominis в урогенитальном тракте бразильских женщин

BMC Infect Dis. 2015; 15: 60.