Остерская средняя школа: МБОУ ОСТЕРСКАЯ СРЕДНЯЯ ШКОЛА, Рославльский район (ИНН 6725008449), реквизиты, выписка из ЕГРЮЛ, адрес, почта, сайт, телефон, финансовые показатели

Содержание

[PDF] Алкадиены – Free Download PDF

Download Алкадиены…

10 класс урок 8

Программа курса химии для 10-11 классов общеобразовательных учреждений (базовый уровень)  А л к а д и е н ы и к а у ч у к и. Понятие об

алкадиенах как углеводородах с двумя двойными связями. Химические свойства бутадиена-1,3 и изопрена: обесцвечивание бромной воды и полимеризация в каучуки. Резина. И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

2

Правила работы за компьютером Время непрерывной работы на компьютере -для учащихся X – XI классов на первом часу учебных занятий 30 минут, на втором – 20 минут. 

При работе за компьютером очень важно соблюдать правильную посадку на рабочем месте, поскольку от нее зависит напряжение глаз, мышц и суставов.

ПРАВИЛЬНАЯ РАБОЧАЯ ПОЗА:  Следует сидеть прямо (не сутулясь)  Недопустимо работать, развалившись в кресле.  Не следует высоко поднимать запястья и выгибать кисти  Колени – на уровне бедер или немного ниже.  Нельзя скрещивать ноги, класть ногу на ногу  Необходимо сохранять прямой угол (900) в области локтевых, тазобедренных и голеностопных суставов.

Так же при работе необходимо:  Дышать ритмично, свободно, глубоко, чтобы обеспечивать кислородом все части тела;  Держать в расслабленном состоянии плечи и руки – в руках не будет напряжения, если плечи опущены;  Чаще моргать и смотреть вдаль.  При ощущении усталости какой-то части тела сделайте глубокий вдох и сильно напрягите уставшую часть тела.  При ощущении усталости глаз следует в течении 2-3 мин окинуть взглядом комнату, устремить взгляд на разные предметы, смотреть в даль (в окно).  Если резко возникло общее утомление, появилось дрожание изображение на экране, следует

немедленно прекратить работу

Для того, чтобы оградить себя от вредного воздействия компьютера, необходимо делать регламентированные перерывы. Для снижения утомления зрительного анализатора во время перерывов рекомендуется выполнять комплексы специальных упражнений (прил. ).

И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

3

Задания Изучите информацию параграфа 5    

учебника «Химия. 10 класс.Базовый уровень» О.С.Габриелян.-М.:Дрофа, 2008. Выполните задания электронной рабочей тетради. ВНИМАНИЕ! Задания к каждому слайду помещены под слайдом, в «заметках». Не забывайте сохранять изменения после каждого выполненного задания. В рабочей тетради письменно – №3,4 стр.46 Творческое задание: подготовьте электронные презентации и сообщения на темы: «Нефть. Способы переработки», «Углеводороды и проблемы экологии».

И.М. Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

5

Алкадиены Общая формула алкадиенов

?

Второе название алкадиенов

?

Сnh3n

Предельные углеводороды

Сnh3n+2

Диеновые углеводороды

Сnh3n-2

Непредельные углеводороды Ароматические углеводороды

И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

6

Номенклатура ИЮПАК Ch3=C(Ch4)-CH=Ch3

2-метилбутадиен-1,3

Ch3=C(Ch4)-C(Ch4)=Ch3

2,3-диметилбутадиен-1,3

Ch4-CH=C(Ch4)-Ch3-CH=Ch3

4-метилгексадиен-1,4

Ch4-CH=C(Ch4)-CH=Ch3

3-метилпентадиен-1,3

Ch3=C=CH-C(Ch4)2-CH 3

4,4-диметилпентадиен-1,2

И. М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

7

Полимеризация алкадиенов (-Ch3-C(Ch4)-C(Ch4)-Ch3-)n

nCh3=C(Ch4)-C(Ch4)=Ch3

(-Ch3=C(Ch4)-C(Ch4)=Ch3-)n

(-Ch3-C(Ch4)=C(Ch4)-Ch3-)n

(-CH(Ch4)=C(Ch4)-CH=Ch3-)n Ch4-CH=C(Ch4)-CH=Ch3 (-CH(Ch4)-C(Ch4)=CH-Ch3-)n

(-Ch4-CH-C(Ch4)=CH-Ch3-)n И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

8

Получение диенов Дегидрирование алканов алкан

-2h3

алкадиен

?

– 2h3

бутадиен-1,3

?

– 2h3

изопрен

?

-2h3

2,3-диметилпентадиен-1,3

И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

9

Качественная реакция на двойную связь Ch3Br-C(Ch4)-C(Ch4)=Ch3

+Br2 Ch3=C(Ch4)-C(Ch4)=Ch3

Ch3Br-C(Ch4)=C(Ch4)Br-Ch3

Ch3Br-C(Ch4)=C(Ch4)-Ch3Br

Ch3=C(Ch4)-C(Ch4)=Ch3

+2Br2

Ch3Br2-C(Ch4)Br2-C(Ch4)=Ch3

Ch3Br-C(Ch4)Br-C(Ch4)Br-Ch3Br

Ch3Br2-C(Ch4)=C(Ch4) -Ch3Br2 И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

10

Получение каучуков

?

изопреновый

этиловый спирт

?

бутадиеновый

?

бутадиен -1,3

2-метилбутан

И. М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

каучук

каучук

? 11

Вулканизация каучука с избытком серы

каучук

И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

Вулканизация каучука с недостатком серы

резина

Дегидрирование 2-метилбутана

эбонит

12

Свойства резины свойство свойство

свойство

Применение резины

И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

13

Программа курса химии для 10-11 классов общеобразовательных учреждений (базовый уровень)  А л к а д и е н ы и к а у ч у к и. Понятие об

алкадиенах как углеводородах с двумя двойными связями. Химические свойства бутадиена-1,3 и изопрена: обесцвечивание бромной воды и полимеризация в каучуки. Резина. И.М.Бурдыгова МБОУ Остерская средняя школа

14

Остерская сельская библиотека, филиал №5

Остерская сельская библиотека, ф.№5

                                         

РЕЖИМ РАБОТЫ  : С 10. 00 час. до 17.00  час.

Перерыв на обед:  С 14.00 час. до 15.00 час.

Выходной день :  В  о  с  к  р  е  с  е  н  ь  е

Адрес:  216537,Смоленская область, Рославльский район,  с.Остер.

Заведующая  библиотекой: Ильчишина Н.П.

Библиотека начала свою деятельность в 1975 году, располагается в здании СДК.

В зону обслуживания библиотеки  входит 1 населенный пункт: с.Остер с населением 1756 человек.

Пользователями библиотеки являются 851 чел.

 в т.ч. дети    331 чел.

 в т.ч.молодежь 140 чел.

Книжный фонд библиотеки составляет 14 401 экз.книг.

За 2018 год выдано 20 245 экземпляров книг.

Библиотека сотрудничает в тесном контакте с администрацией «Остерское сельское поселение», Советом депутатов муниципального образования «Остерское сельское поселение», МБОУ «Остерская средняя школа», МБДОУ «Остерский д/сад «Солнышко», Остерский сельский Дом Культуры.

          ОСНОВНЫЕ НАРАВЛЕНИЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ БИБЛИОТЕКИ :

  • В помощь учебному процессу
  • Библиотека и семья
  • Художественно-эстетическое воспитание
  • Пропаганда здорового образа жизни
  • Гражданско-патриотическое воспитание
  • Правовое просвещение
  • Экологическое просвещение
  • Продвижение книги,чтения
  • Духовно-нравственное воспитание
  • Работа с социально незащищенными слоями населения
  • Работа клубов по интересам
  • Краеведческая деятельность

При библиотеке организован  клуб любителей поэзии «Родник».

Библиотека работает по программе «Оглянись и сохрани».

В 2013 году открыт пункт правовой информации, который обеспечивает доступ к социально  значимой информации федерального ,регионального и местного уровней.

Так же оказываем платные услуги населению:

 – Распечатка на принтере;

– Предоставление компьютера для самостоятельной работы;

– Набор текста на компьютере;

– Совместная работа на компьютере посетителя библиотеки и работника;

– Копирование законодательных документов на электронные носители;

– Просмотр и чтение информации из сети ИНТЕРНЕТ;

– Услуги электронной почты.

Библиотека участвовала в конкурсах: « В поисках нового образа», «В судьбе природы-наша судьба», «Мы за здоровый

образ жизни».

Рославльский район – Международная Ассоциация Развития Образования

 

Комитет образования Администрации муниципального образования Рославльского района
216500, Смоленская область, г. Рославль, ул. Ленина, д. 18-а
Тел.: (48134) 4-17-56
www.roslobr.ru/
[email protected]
Начальник отдела — Филипченко Сергей Викторович

МОУ Жарынская средняя (полная) ОШ
Смоленская область, Рославльский район, д. Красная Горк
Телефон 5-63-35
Директор-Симакова Елена Александровна

МОУ Кирилловская нач.шк.-д.сад «Теремок»


Смоленская область, Рославльский район, д. Кирилл
Телефон 5-79-87
Директор-Родичкина Людмила Михайловна

МОУ Костыревская основная ОШ
Смоленская область, Рославльский район, д. Костыри
Телефон 5-97-25
Директор-Легчилин Алесей Владимирович

МОУ Хорошовская средняя (полная) ОШ
Смоленская область, Рославльский район, д. Хорошов
Телефон 5-73-41
Директор-Николаев Эдуард Владимирович

МОУ Чижовская средняя школа
Смоленская область, Рославльский район, д. Чижовка
[email protected]
Телефон 5-47-41
Директор-Гуменюк Татьяна Анатольевна

МОУ «Астапковичская средняя (полная) ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Астапковичи, д. Астапкович
Телефон 5-67-37
Директор-Голякова Тамара Анатольевна

МОУ «Волконщинская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Волконщин
Телефон 5-92-20
Директор-Шлык Мария Федоровна

МОУ «Грязенятская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Грязенять
Телефон 5-66-19
Директор-Степачев Виктор Семенович

МОУ «Епишевская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Епишево-2
Телефон 5-65-43
Директор-Митрошин Алексей Иванович

МОУ «Кирилловская средняя (полная) ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Малые Кириллы, ул. Головлёв
Телефон 5-71-50
Директор-Якубов Николай Иванович

МОУ «Крапивенская средняя (полная) ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Крапивна
Телефон 5-45-31
Директор-Королев Игорь Викторович

МОУ «Павловская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Павловка, ул. Чехова
Телефон 5-95-72
Директор-Зеренков Владимир Григорьевич

МОУ «Перенская средняя ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Перенк
Телефон 5-74-92
Директор-Колпачкова Марина Викторовна

МОУ Волковичская основная ОШ
Смоленская область, Рославльский район, д. Волковичи
Директор Трубач Анатолий Валентинович
Телефон 5-35-24

МОУ Екимовичская средняя (полная) ОШ
Смоленская область, Рославльский район, с. Екимовичи, ул. Ленинская, д. 3
Телефон 5-53-92
Директор-Мартьянова Мария Павловна

МОУ Пригорьевская средняя (полная) ОШ
Смоленская область, Рославльский район, д. Пригорь
Телефон 5-34-95
Директор-Глинкина Жанна Григорьевна

МОУ Сырокоренская основная ОШ
Смоленская область, Рославльский район, д. Новосёлк
Телефон 5-44-27
Директор-Кулаженкова Нина Ивановна

МОУ «Богдановская средняя (полная) ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Богданово
Телефон 5-36-41
Директор-Хилинская Лидия Ивановна

МОУ «Громашовская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Громашов
Телефон 5-93-28
Директор-Аксенов Александр Васильевич

МОУ «Ивановская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Ивановское
Телефон 5-46-41
Директор-Куликова Наталья Ивановна

МОУ «Косковская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Коск
Телефон 5-75-17
Директор-Чечурина Татьяна Павловна

МОУ «Крапивенская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, деревня Крапивенский
Телефон 5-82-78
Директор-Кузнецов Валерий Антонинович

МОУ «Красниковская средняя (полная) ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Барсук
Телефон 5-94-33
Директор-Квасова Людмила Васильевна

МОУ «Лесниковская основная ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, д. Лесник
Телефон 5-85-73
Директор-Леченкова Лилия Аркадьевна

МОУ «Липовская средняя ОШ имени Героя Советского Союза И. Т. Гришина»
Смоленская область, Рославльский район, д. Липовка
Телефон 5-64-23
Директор-Амелина Валентина Алексеевна

МОУ «Остерская средняя (полная) ОШ»
Смоленская область, Рославльский район, с. Остер, ул. Школьная
Телефон 5-39-63
Директор-Терехова Татьяна Ивановна

МОУ «Савеевская основная ОШ имени М. С. Добрынина»
Смоленская область, Рославльский район, д. Савеево, д. Савеев
Телефон 5-43-19
Директор-Корниенко Павел Пантелеевич

Смоленское областное ГОУ для детей с отклонениями в развитии «Екимовичская средняя общеобразовательная С(к)Ш-И VI вида»
Смоленская область, Рославльский район, п. Екимовичи, ул. Школьная
Телефон (48134)5-51-93
Директор-Андреев Владимир Александрович

В каких школах Смоленской области отремонтируют спортзалы

В рамках проекта «Детский спорт» в Смоленской области в 2016 году обновят три десятка залов и открытых площадок. А всего с начала реализации этой программы, которая началась два года назад, новое оборудование и ремонт ждут около 70 спортивных объектов.

С наступлением каникул во многих школах области сразу началась подготовка к новому учебному году. За летние месяцы в нескольких сельских и городских учебных заведениях предстоит обновить покрытие в спортзалах и на площадках, установить новое оборудование и обеспечить необходимым инвентарем.

Если два года основным направлением программы был ремонт спортивных объектов в небольших сельских школах области, то в 2016-м положительные изменения произойдут и на площадках учебных заведений в районных центрах, а также в Смоленске.

«Принципиально пошли именно в село, потому что в России существует порядка 18 тысяч таких школ, где необходимо отремонтировать спортивный зал, заменить окна, положить новый пол и сделать многое другое», – рассказал о проекте «Детский спорт» во время одной из рабочих поездок заместитель председателя Государственной Думы России Сергей Неверов.

Результатом двухлетней работы проекта в Смоленской области стали 29 спортзалов и восемь площадок, отремонтированных и построенных в 19 районах области. Обновленные залы служат не только школьникам, но и многим другим жителям сел и деревень, в них открываются спортивные секции.

«В нашей школе проводит занятия по борьбе районная детско-юношеская спортивная школа, спортом занимаются и дети, и взрослые, – рассказал Иван Свириденков, директор Белавской школы, что в Дорогобужском районе. – У нас появился тренажерный зал, да и сам спортзал постоянно занят».

Помимо ремонта, сельские школы в рамках программы получили инвентарь: мячи, баскетбольные корзины, волейбольные сетки, гимнастические стенки, на спортплощадках установили новые турники.

В 2016 году проект получил расширение. Как отметил заместитель председателя Госдумы Сергей Неверов, Смоленская область стала одним из первых регионов, где приступили к ремонту школьных спортзалов и площадок в крупных населенных пунктах.

«Детский спорт» в 2016-м придет в 32 смоленские школы в 19 районах области. Стоит отметить, что обновят и две школы в Смоленске: в средней школе №7 будет отремонтирован спортивный зал, а школа №40 получит новый стадион.

ЗАВЕРШЕННЫЕ ПРОЕКТЫ

Велижский район: Селезневская средняя общеобразовательная школа.
Вяземский район: Андрейковская, Вязьма-Брянская и Кайдаковская средние общеобразовательные школы, Семлевская средняя общеобразовательная школа №2.
Гагаринский район: Кармановская средняя общеобразовательная школа, Никольская средняя общеобразовательная школа им. И. А. Денисенкова.
Демидовский район: Заборьевская средняя общеобразовательная школа.
Дорогобужский район: Белавская основная общеобразовательная школа, Усвятская средняя общеобразовательная школа.
Духовщинский район: Пречистенская средняя общеобразовательная школа, Третьяковская основная общеобразовательная школа.
Краснинский район: Гусинская средняя общеобразовательная школа.
Новодугинский район: Днепровская средняя общеобразовательная школа.
Починковский район: Переснянская средняя общеобразовательная школа.
Рославльский район: Остерская и Перенская средние общеобразовательные школы.
Руднянский район: Понизовская средняя общеобразовательная школа.
Сафоновский район: Барановская, Вышегорская и Рыбковская средние общеобразовательные школы.
Смоленский район: Богородицкая, Гнездовская, Сметанинская, Стабенская и Талашкинская средние общеобразовательные школы.
Сычевский район: Дугинская средняя общеобразовательная школа.
Угранский район: Угранская средняя общеобразовательная школа.
Хиславичский район: Ленинская средняя общеобразовательная школа.
Холм-Жирковский район: средняя общеобразовательная школа им. М. Горького, Агибаловская, Игоревская и Нахимовская средние общеобразовательные школы.
Шумячский район: Первомайская средняя общеобразовательная школа.
Ярцевский район: Засижьевская, Капыревщинская и Суетовская средние общеобразовательные школы.

ПРОЕКТЫ В СТАДИИ РЕАЛИЗАЦИИ

Велижский район: Велижская средняя общеобразовательная школа №2.
Вяземский район: средняя школа №2 г. Вязьмы Смоленской области.
Гагаринский район: Пречистенская средняя общеобразовательная школа им. И. И. Цапова, средняя общеобразовательная школа №3 г. Гагарина.
Демидовский район: Шаповская основная школа, средняя школа №2 г. Демидова.
Дорогобужский район: Дорогобужская средняя общеобразовательная школа №2, Верхнеднепровская средняя общеобразовательная школа №2.
Духовщинский район: Добринская основная общеобразовательная школа, Озерненская средняя общеобразовательная школа №1.
Ельнинский район: Ельнинская средняя школа № 2 им. К. И. Ракутина.
Кардымовский район: в августе 2016 года планируется открытие физкультурно-оздоровительного комплекса с залом для игровых видов спорта и тренажерным залом.
Краснинский район: Краснинская средняя школа.
Монастырщинский район: Монастырщинская средняя общеобразовательная школа им. А. И. Колдунова.
Починковский район: Шаталовская средняя общеобразовательная школа.
Рославльский район: Жарынская средняя школа, Липовская средняя школа им. Героя Советского Союза И. Т. Гришина, Рославльская средняя общеобразовательная школа №10.
Руднянский район: Чистиковская и Голынковская средние общеобразовательные школы.
Сафоновский район: средняя общеобразовательная школа №3 и средняя общеобразовательная школа №8 г. Сафоново Смоленской области.
Смоленский район: Касплянская, Печерская и Хохловская средние общеобразовательные школы.
г. Смоленск: средние общеобразовательные школы №7 и №40 г. Смоленска.
Сычевский район: Сычевская средняя общеобразовательная школа №1.
Темкинский район: планируется открытие физкультурно-оздоровительного комплекса с залом для игровых видов спорта и тренажерным залом.
Хиславичский район: Иозефовская основная общеобразовательная школа.
Холм-Жирковский район: Тупиковская и Холмовская средние общеобразовательные школы.
Ярцевский район: Михейковская средняя общеобразовательная школа, Ярцевская средняя общеобразовательная школа №1.

ЗАПЛАНИРОВАННЫЕ ПРОЕКТЫ

Глинковский и Ершичский районы: планируется участие в программе по ремонту спортивных залов и площадок учебных заведений в 2017 году.

Ошланская средняя школа – Главная страница

Категории раздела
Статистика

Онлайн всего: 1

Гостей: 1

Пользователей: 0

С 26 сентября по 3 октября 2021 года в г. Адлере (Краснодарский край) состоялись всероссийские соревнования по легкоатлетическому четырехборью «Шиповка юных» среди обучающихся общеобразовательных организаций. В программу четырехборья входят бег на 60 метров, прыжок в длину/высоту, метание снаряда и бег на 600 метров (500 метров – девушки). Руководила сборной командой Кумёнского района Наталья Леонидовна Альминова, а помогала ей УЧИТЕЛЬНИЦА КОГОБУ СШ с. Ошлань Богородского района СП с. ХОРОШИ КОРОБЕЙНИКОВА МАРИЯ ВЛАДИМИРОВНА.
По итогам всех видов спортсменки заняли 4-е место из 11 команд.
Молодцы!
Мария Владимировна делится своими впечатлениями:
– Кроме соревнований были культурные мероприятия.
Мы посетили механический музей изобретений Леонардо да Винчи. В Сочи Парке нас удивили поющие фонтаны, мы увидели олимпийские постройки, которые были сооружены для зимней олимпиады 2014 года … Читать дальше »


Школьное лесничество “Друзья Природы” с. Ошлань, Богородского района приняло участие во Всероссийской акции “Сохрани лес”, проводимой при поддержке президентских грантов и АНО “Охрана леса”.
4 октября члены школьного лесничества получили от АНО “Кедры России” и посадили 6 двухлетних саженцев: три саженца кедра сибирского и три саженца кедра корейского.
Торхова Любовь Михайловна, член Унинского лесничества, рассказала ребятам, как правильно сажать кедры, ухаживать за ними и закрывать на зиму.
Было подготовлено удобное солнечное место для саженцев.
Совместное доброе дело подарило радость.
Участники посадки постараются сделать всё, чтобы эти хрупкие саженцы превратились в крепкие деревья и радовали всех своей красотой.

Бердникова Татьяна Владимировна – руководитель школьного лесничества

… Читать дальше »


5 октября, в День учителя, педагогов  Хорошевской школы поздравили ученики.   Дети исполняли роли литературных, исторических и мифологических персонажей.  Учащиеся начальных классов исполнили песню «Учительский вальс». Работала «почта»: с помощью «волшебного почтового ящика» каждый ученик мог поздравить своего любимого учителя с профессиональным праздником. Как известно, для наставника нет ничего приятнее добрых слов из уст тех, кого он воспитывает и учит!  … Читать дальше »



5 октября, в День учителя, лучших педагогов региона чествовали в Кировском лесопромышленном колледже. Там в торжественной обстановке состоялось вручение почетных знаков Кировской области «Педагогическая слава».
Награда вручается работникам образования, которые трудятся в отрасли не менее 10 лет и стабильно добиваются высоких результатов. В 2021 году среди полусотни награжденных не только учителя. Также отмечены воспитатели, преподаватели среднего профессионального и дополнительного образования. Они трудятся как в областном центре, так и в районах.
Среди награжденных учитель начальных классов КОГОБУ СШ с. Ошлань Кондратова Татьяна Васильевна.
Педагогов поздравил Председатель Законодательного Собрания Кировско … Читать дальше »


Сегодня наши ученики поздравили нас с Днём учителя.
Мы от души благодарим их за особую душевную атмосферу.
Нас не покидало ощущение домашнего уюта и тепла.
Спасибо за проникновенные слова, звучавшие в наш адрес, за добрые шутки, за художественные номера.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

… Читать дальше »

1 октября, в День пожилых людей, учащиеся школы поздравили ветеранов с праздником. Они вручили ветеранам открытки, сделанные своими руками на уроках технологии.
– Приятно, когда радуются и улыбаются тебе в ответ, – говорят учащиеся.
– Если это твоя бабушка – приятно вдвойне! – добавляет Лиза Елькина.
Фото Шумихиной Ангелины


Вчера на базе нашей прошли ставшие уже традиционными IV областные Сухомлинские чтения. Знаменательно, что проходят они ежегодно в день рождения удивительного человека и выдающегося советского педагога Василия Александровича Сухомлинсконо. Его педагогические идеи остаются актуальными и сегодня. Они развиваются, получают новое звучание в современном стремительно развивающемся мире.

В этом году, как и в прошлом, в связи с пандемией чтения проводились в двух форматах: очном и заочном. В заочном этапе приняли участие более 30 педагогов из г. Кирова, Кировской области, г. Ангарска и Южной Осетии.

Количество участников очного этапа было ограничено. 28 сентября в КОГОБУ СШ с. Ошлань собрались педагоги и обучающиеся школы с. Ошлань, педагоги структурных подраз … Читать дальше »


21 мая на базе МОАУ ДО «Центр развития творчества детей и юношества «Лабиринт», г. Кирова был проведен заочно (в связи с ограничениями на проведение массовых мероприятий из-за эпидемии коронавируса) ДЕВЯТЫЙ ВСЕРОССИЙСКИЙ (с международным участием) КОНКУРС ТВОРЧЕСКИХ РАБОТ «ТВОЕ ПРИЗВАНИЕ», посвящённый памяти доктора педагогических наук, профессора Василия Федоровича Сахарова.
В конкурсе приняли участие около семидесяти представителей из 9 регионов Российской Федерации, которые представили 19 образовательных учреждений.
Целью конкурса является распространение опыта профориентационной работы в учебных заведениях; гражданско-патриотическое и духовно-нравственное воспитание молодёжи во взаимосвязи с трудовым воспитанием.
ВТОРОЕ МЕСТО в номинации «Духовно-нра … Читать дальше »


КОГОБУ СШ с. Ошлань ПОЗДРАВЛЯЕТ ветерана педагогического труда АННУ АЛЕКСЕЕВНУ ДУБОВЦЕВУ с 90-летием!!!
Анна Алексеевна родом из д. Шурма Уржумского района. После окончания Омутнинского учительского техникума в 1948 году по распределению приехала в с. Ухтым, где работала в детском доме. Затем после окончания Кировского педагогического института в 1952 году стала трудиться в с. Хороши. Вместе с воспитанниками детского дома в школе обучалось 400 человек. После расформирования детского дома осталось более 200.
Анна Алексеевна преподавала русский язык, литературу и историю. Здесь, в Хорошах, она познакомилась с будущим мужем Алексеем.
2 года молодая семья жила в Богородском. Дубовцева А. А. работала инспектором РОНО.
В 1963 году супруги Дубовцевы вернулись … Читать дальше »


Олымская средня общеобразовательная школа – Главная страница

Сведения об организации

 

Олымская средняя

 

общеобразовательная

 

школа

 

 

С нашей школой мы связаны навек общей судьбой.

Школа – будни и праздники, школа – дом наш с тобой.

Здесь не знаем никогда покоя,

Жизнь бурлит – кипит у нас с тобою,

Здесь друзья вокруг, здесь всё чудесно –

Жизнь в Олымской школе интересна.

 

Наша школа овеяна ореолом побед,

И в учёбе и в спорте ей равных попросту нет.

В школе нашей никогда не скучно,

Здесь живёт народ неравнодушный,

Здесь народ талантливый весёлый.

Это – гордость, это – слава школы.

 

 

Школа наша – Олымская.

Не страшны ей года.

Ты душою не старишься, ты душой молода.

Так живи и дальше, школа наша!

Год от года становись всё краше!

В этой бурной жизни как и прежде

Оставайся островком надежды!

 

 

 


Телефон горячей линии по вопросам обновления содержания общего образования

8 800 200 91 85, доб. 7

 



  

«УЧЕБА – ЭТО СЧАСТЬЕ».

РУКОВОДИТЕЛЬ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО ЦЕНТРА «СИРИУС» ЕЛЕНА ШМЕЛЕВА  РАССКАЗАЛА О СТРАТЕГИЧЕСКИХ КОНТУРАХ РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОГО ОБРАЗОВАНИЯ. Статья


Правила поведения и порядок действия населения при получении сигнала “Внимание всем!”


Официальные страницы Уполномоченного по правам ребенка в Курской области, Детского общественного совета,

Совета отцов Курской области

Официальный сайт Уполномоченного по правам ребенка в Курской области  https://pravarebenka46.ru/ ;  Инстаграмм  natalia_listopadova_     https://vk.com/ombudsmendeti46

Детский общественный совет  https://www.instagram.com/detskiy_sovet?r=nametag ;  https://vk.com/children_46

Совет отцов Курской области  https://vk.com/father46

https://vk.com/away.php?to=https%3A%2F%2Finstagram. com%2Fsovet_otcov46%3Figshid%3D1v2p8yn1qbyo3&cc_key=


ПАМЯТКА “ЗАЩИТИ СЕБЯ ОТ ТУБЕРКУЛЕЗА”


ВНИМАНИЕ, РОДИТЕЛИ!

Представляем вам информационный ресурс “Навигатор дополнительного образования детей Курской области”

Навигатор – единая база кружков, секций, творческих объединений для детей от 5 до 18 лет, в нём содержится информация об учреждениях дополнительного образования Курской области и программах, которые они реализуют.

С помощью Навигатора каждый ребенок сможет найти себе занятие по душе, исходя из собственных предпочтений и пожеланий.

Теперь записаться на занятия вокалом, хореографией техническим творчеством и т.д. можно не выходя из дома.

Нужно лишь зайти на сайт  https://р46.навигатор.дети/ , пройти простую процедуру регистрации, и перед вами откроются все возможности системы дополнительного образования региона.

#навигатор46 #рмц46 #образование46


28 января – Международный день защиты персональных данных


“Как не стать жертвой насилия”

Советы инспекторов по делам несовершеннолетних для детей и подростков, а также их родителей

Чтобы не стать жертвой преступления, дети и подростки должны знать, как вести себя с незнакомыми людьми на улице, во дворе, в транспорте. Уважаемые родители, чтобы обезопасить своих детей, в том числе во время прогулок в каникулы и новогодние выходные дни, обучите своих детей простым правилам поведения:  …Читать дальше   

ЕСЛИ БЕДА ВСЕ ЖЕ СЛУЧИЛАСЬ:

– запомни приметы нападавшего: возраст, одежду, рост, и направление, в котором убежал преступник

– сообщи родителям

– позвони в полицию (с мобильного телефона по номеру «102»)

– дождись полицейских на месте преступления.


ПРАВИЛА ПОВЕДЕНИЯ НА ВОДОЁМАХ В ОСЕННЕ-ЗИМНИЙ ПЕРИОД

     С наступлением заморозков (иногда уже в октябре-ноябре) на водоёмах появляется первый лёд. Образовавшийся первый ледяной покров привлекает детей, подростков и некоторых взрослых опробовать его на прочность. Однако тонкий лед очень опасен. Для того чтобы “ледяные” трагедии не повторялись, необходимо соблюдать правила безопасности вблизи и на водоемах в осенне-зимний период:

  • не выходите на тонкий, неокрепший лед;
  • не проверяйте на прочность лед ударом ноги;
  • случайно попав на тонкий лед, следует немедленно отойти по своему же следу к берегу, скользящими шагами, не отрывая ног ото льда и расставив их на ширину плеч, чтобы нагрузка распределялась на большую площадь;
  • точно так же поступают при предостерегающем потрескивании льда и образовании в нем трещин.

УВАЖАЕМЫЕ РОДИТЕЛИ!

  • Не допускайте бесконтрольного нахождения и игр детей вблизи водоемов, разъясните им смертельную опасность пренебрежения данными рекомендациями.

Уважаемые родители (законные представители) будущих первоклассников!

В соответствии с приказом Министерства просвещения РФ от 2 сентября 2020 г. № 458 “Об утверждении Порядка приема на обучение по образовательным программам начального общего, основного общего и среднего общего образования”:

1. Прием заявлений на обучение в первый класс для детей, проживающих на закрепленной территории, начинается 1 апреля 2021 года и завершается 30 июня 2021 года.

2. Для детей, не проживающих на закрепленной территории, прием заявлений на обучение в первый класс начинается 6 июля 2021 года до момента заполнения свободных мест, но не позднее 5 сентября 2021 года.


Мы – активные участники национального проекта “ОБРАЗОВАНИЕ”


2020 год – Год памяти и славы!

Школьник помнит!

 

     


27 января – день освобождения Ленинграда от фашистской блокады

   


Грипп, коронавирусная инфекция и другие острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ)

Видеоматериал КОРОНАВИРУС

   

 


Минюст России сообщает о возможных случаях

телефонного мошенничества на территории Российской Федерации

 

     Начиная с 2016 года, в Минюст России поступило более 3000 заявлений граждан из различных субъектов Российской Федерации с просьбой предоставить бесплатного адвоката для представления интересов в качестве потерпевшего в уголовном судопроизводстве. По сведениям МВД России, в Следственный комитет Российской Федерации также поступают многочисленные заявления аналогичного содержания.

     Зафиксировано повсеместное возникновение ситуаций, когда неизвестные лица связываются с гражданами по телефону и, представляясь следователями правоохранительных органов или сотрудниками иных государственных органов Российской Федерации, сообщают о возможности возместить стоимость услуг адвоката, а также получить моральную компенсацию за приобретенные фальсифицированные биологически активные добавки. Для этого, как правило предлагается направить в Минюст России или другие ведомства заявление с просьбой предоставить бесплатного государственного адвоката для представления интересов граждан в уголовном судопроизводстве. Через некоторое время с гражданами связывается лицо, представляющееся адвокатом, которое под различными предлогами сообщает о необходимости перевести денежные средства через платежные системы.

     В настоящее время территориальными органами МВД России проводится проверка в отношении полученных от граждан заявлений, за результатами проверки установлен дополнительный контроль Генеральной прокуратуры Российской Федерации.

     Минюст России просит граждан быть бдительными и сообщает что лица предлагающие направить денежные средства на счета судов и других государственных учреждений посредством систем быстрых денежных переводов, не могут являться представителями Минюста России и других федеральных органов исполнительной власти Российской Федерации, а также правоохранительных органов, осуществляющими свои должностные обязанности.

 


3 сентября – День солидарности в борьбе с терроризмом

Эта дата была установлена в соответствии с Федеральным законом Российской Федерации «О днях воинской славы России» от 6 июля 2005 года в связи с трагическими событиями:

в Будённовске 14—19 июня 1995 годана спектакле «Норд-Ост» 23 – 26 октября 2002 годав Беслане 1 – 3 сентября 2004 годамосковском метро 29 марта 2010 года и в аэропорту Домодедово 24 января 2011 года

День солидарности – общий

В нашей школе во всех классах  прошли мероприятия, посвященные этой дате 

 

Техника безопасности при экстремальных ситуациях, в том числе при терактах

 


ВНИМАНИЕ!  Приём в 1 класс в 2020 году

Уважаемые родители!

С 1 февраля 2020 года начинается прием заявлений о зачислении в 1 класс Муниципального казенного общеобразовательного учреждения «Олымская средняя общеобразовательная школа» Касторенского района Курской области. Всем желающим подать заявление необходимо прийти в школу по адресу 306716, Курская область, Касторенский район, п. Олымский, ул. Садовая д. 37

Также появилась возможность подать заявление в электронном виде через Портал государственных и муниципальных услуг, перейдя по ссылке https://www.gosuslugi.ru/136613/1

Просим обратить внимание на следующие обстоятельства:

Все заявления, независимо от способа подачи, попадают в общую очередь.

  1. Заявления имеют право подавать только родители (законные представители) ребенка.
  2. Срок обработки заявления составляет 7 дней (начиная с дня, следующего за днем подачи заявления).
  3. Подача заявления в электронном виде не избавляет от необходимости лично прийти в школу с оригиналами документов в назначенное время. Дату и время, назначенные школой для предъявления оригиналов документов, Вы узнаете в личном кабинете на портале государственных и муниципальных услуг.
  4. Прием заявлений в электронном виде начинается 1 февраля в 08 часов 00 минут. Заявления, поданные ранее, будут отклонены.
  5. Иностранные граждане и лица без гражданства обязаны подтвердить родство (или законность представления интересов ребенка), а также законность нахождения на территории РФ.
  6. Все документы представляются заявителем на русском языке, либо вместе с заверенным в установленном порядке переводом на русский язык.

ТЕЛЕФОН ДОВЕРИЯ

“Телефон доверия” следственного управления Следственного комитета РФ по Курской области:

телефон “Ребенок в опасности” 8 (4712) 70-29-87

“Телефон доверия” 8 (4712) 70-36-73


Творческий проект “Наша школа – Наша семья!”

   

Читать дальше …


Результаты независимой оценки качества оказания  образовательных услуг 

С результатами независимой оценки качества оказания образовательных услуг можно ознакомится на http://bus.gov.ru/pub/independentRating/list 

http://bus.gov.ru/pub/independentRating/list

 


Видеоролики повышающие социальный статус педагога, разработанные Минобрнауки России

“Учитель – больше, чем профессия!”

“Говорите учителям “Спасибо”

“Учитель – гордость России”


 

СДЕЛАЕМ МИР ЧИЩЕ

 

Ученики и работники школы присоединились к Всероссийской акции “Сделаем мир чище” (Весна 2019). Убрали территорию школы, стадиона. Вместе с работниками Администрации муниципального образования убрали территорию памятника погибшим землякам.

 

    

 


 

Права и обязанности родителей

Права и обязанности родителей по воспитанию и образованию детей, защите их прав и законных интересов

    Читать дальше …

 

 

Schlafen 12 является прогностически благоприятным и снижает C-Myc и пролиферацию при аденокарциноме легкого, но не при плоскоклеточной карциноме легкого

Abstract

Simple Summary

Различные подтипы рака легких по-разному реагируют на лечение. Чтобы понять сигнальные пути, которые диктуют агрессивное поведение аденокарциномы легкого по сравнению с плоскоклеточной карциномой легкого, мы провели анализ выживаемости, который продемонстрировал, что белок Шлафен 12 коррелирует с лучшей выживаемостью у пациентов с аденокарциномой легкого, но не у пациентов с плоскоклеточной карциномой легкого. что указывает на специфичность действия пути SLFN12 на подтипы рака легких.Мы исследовали этот специфический эффект, подтвердив способность Schlafen 12 снижать пролиферацию клеток аденокарциномы легкого in vitro, но не пролиферацию плоскоклеточного рака легкого. Более того, мы продемонстрировали, что Schlafen 12 действует посредством ингибирования трансляции белка c-myc в клетках аденокарциномы легких. Способность определять точные сигнальные пути, которые модулируют агрессивное поведение каждого подтипа рака легких, поможет в будущем развитии точной медицины для борьбы с этим сложным заболеванием.

Abstract

Шлафен 12 (SLFN12) – промежуточный человеческий шлафен, который вызывает дифференцировку энтероцитов, рака простаты и молочной железы. Мы предположили, что SLFN12 влияет на биологию рака легких. Мы исследовали различия в выживаемости в опухолях с высокой и низкой экспрессией SLFN12 в двух базах данных. Затем мы аденовирусно сверхэкспрессировали SLFN12 (AdSLFN12) в клетках HCC827, h33 и h2975 для моделирования аденокарциномы легкого (LUAD), а также в клетках h3170 и HTB-182, представляющих плоскоклеточный рак легкого (LUSC).Мы проанализировали пролиферацию с помощью колориметрического анализа, экспрессию мРНК с помощью RT-qPCR и белка с помощью вестерн-блоттинга. Для дальнейшего изучения функциональной значимости SLFN12 мы коррелировали SLFN12 с семнадцатью функциональными сигнатурами онкогенных генов в опухолях человека. Низкая опухолевая экспрессия SLFN12 предсказывала худшую выживаемость у пациентов с LUAD, но не у пациентов с LUSC. AdSLFN12 модулировал экспрессию SCGB1A1, SFTPC, HOPX, CK-5, CDh2 и P63 сложным образом в этих клетках. AdSLFN12 снижает пролиферацию во всех линиях клеток LUAD, но не в клетках LUSC.Экспрессия SLFN12 обратно коррелировала с экспрессией сигнатуры гена, ассоциированного с myc, в LUAD, но не в опухолях LUSC. Сверхэкспрессия SLFN12 снижает белок c-myc в клеточных линиях LUAD, но не в LUSC, путем ингибирования трансляции c-myc. Наши результаты показывают, что SLFN12 улучшает прогноз при LUAD частично за счет c-myc-зависимого замедления пролиферации.

Ключевые слова: Schlafen 12, c-myc, аденокарцинома легкого, плоскоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого

1. Введение

Рак легкого является основной причиной смерти человека от рака, вызвав 1.76 миллионов смертей во всем мире в 2018 году [1]. Хирургия, цитотоксическая химиотерапия и лучевая терапия остаются основой терапии рака легкого, поскольку более специфическая таргетная терапия недоступна [2]. Рак легкого классифицируется как редкая форма мелкоклеточного рака легкого и более распространенный немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) [3]. Гистологически НМРЛ делится на аденокарциному легкого (LUAD), которая составляет 50% случаев, и плоскоклеточный рак легкого (LUSC), составляющий 40% случаев, с дополнительными 10%, которые классифицируются как недифференцированные крупноклеточные. карцинома [4].Сложные сигнальные молекулярные пути способствуют агрессивному поведению и гетерогенности каждого гистологического подтипа НМРЛ. Следовательно, крайне важно понимать разрозненные сигнальные пути, которые модулируют агрессивность каждого подтипа рака легких, чтобы разработать более целенаправленную прецизионную терапию.

Шлафены – это группа разнообразных генов, которые экспрессируются как у людей, так и у грызунов. Шлафены делятся на короткие, средние и длинные семейства в зависимости от их размера и структуры.В то время как грызуны экспрессируют все три семейства Schlafens, люди экспрессируют четыре длинных Schlafen (hSLFN5, 11, 13 и 14), только один промежуточный Schlafen (hSLFN12) и ни одного короткого Schlafen.

Длинные Schlafens недавно были комплексно вовлечены в биологию рака легких. Сообщалось, что экспрессия SLFN5 является прогностически благоприятной при раке легких [5], но она активирует переход эпителия в мезенхиму in vitro [6]. Высокая экспрессия SLFN11 также связана с благоприятным исходом при раке легких, возможно, по крайней мере частично, потому что он повышает чувствительность рака легких к специфическим цитотоксическим препаратам, таким как ДНК-алкилирующие агенты и ингибиторы PARP [7,8,9].Тем не менее, влияние этих длительных Шлафенов на рак легких не было разделено между аденокарциномой и плоскоклеточным раком легкого. Кроме того, длинные Schlafens обладают как последовательностями направленного действия на ядро, так и способностью связываться с ДНК [10], тогда как промежуточный SLFN12 не имеет такой последовательности и локализован в цитоплазме. Таким образом, нельзя ожидать, что SLFN12 будет действовать так же, как длинный Schlafen. Наша ранее опубликованная работа идентифицировала SLFN12 как модулирующую дифференцировку в кишечном эпителии, раке груди и раке простаты [11,12,13].Теперь мы хотим понять, играет ли SLFN12 важную роль в биологии и прогнозе рака легких и может ли эта роль различаться между аденокарциномой и плоскоклеточной карциномой легкого.

Наш анализ показал, что высокая по сравнению с низкой экспрессией SLFN12 может классифицировать пациентов с аденокарциномой легких, но не с плоскоклеточной карциномой, на хорошую и плохую выживаемость. SLFN12 снижал пролиферацию линий клеток LUAD, но не линий клеток LUSC in vitro. Геномный анализ рака легких человека показал, что экспрессия SLFN12 обратно коррелирует с сигнатурой гена c-myc в LUAD, но не в LUSC, и мы подтвердили это открытие на уровне белка с использованием клеточных линий.Кроме того, мы продемонстрировали, что SLFN12 механически действует путем ингибирования трансляции белка c-myc. В заключение, наши результаты показывают, что SLFN12 играет благоприятную прогностическую роль при аденокарциноме легких, по крайней мере, частично, модулируя экспрессию c-myc. Этот путь может быть мишенью для будущей высокоточной терапии аденокарциномы легкого.

2. Результаты

2.1. Экспрессия Schlafen12 коррелирует с лучшей выживаемостью при аденокарциноме легкого

Наш анализ профилей экспрессии генов в группе пациентов с немелкоклеточным раком легкого с использованием общедоступного инструмента km-plotter [14] показал, что более высокая экспрессия SLFN12 коррелирует с лучшей выживаемостью в пациенты с аденокарциномой легкого (отношение рисков = 0.59, n = 719, p -значение <0,0001). Средняя выживаемость для пациентов с аденокарциномой, которые экспрессировали высокие уровни SLFN12, составила 117,3 месяца по сравнению с 73,3 месяца у пациентов с низкой экспрессией SLFN12 (A). Напротив, экспрессия SLFN12 не коррелировала с выживаемостью у пациентов с подтипом плоскоклеточной карциномы легких (отношение рисков = 1,03, n = 524, p -значение = 0,78) (B) [15]. Мы подтвердили эти результаты путем анализа с использованием онлайн-инструмента, отличного от атласа белков человека [16,17], который показывает аналогичные результаты (C, D).

Schlafen12 (SLFN12) коррелирует с выживаемостью при аденокарциноме легких. Анализ выживаемости общедоступного набора данных когорт пациентов с раком легкого (http://kmplot.com/analysis/) показывает, что ( A ) экспрессия SLFN12 коррелирует с общей выживаемостью после постановки диагноза аденокарциномы легкого (LUAD) ( n ). = 719, p <0,01) и ( B ) Экспрессия SLFN12 не коррелирует с общей выживаемостью после постановки диагноза у пациентов с плоскоклеточным раком легких (LUSC) ( n = 524, p = 0.78). Медиана экспрессии SLFN12 использовалась в качестве порогового значения, а медиана выживаемости в месяцах была рассчитана для когорты как с высокой, так и с низкой экспрессией. Параллельный анализ выживаемости с помощью другого инструмента (http://www.proteinatlas.org) подтверждает, что экспрессия мРНК SLFN12 ( C ) коррелирует с общей выживаемостью после постановки диагноза при LUAD ( n = 500, p = 0,0052), в то время как ( D ) экспрессия мРНК SLFN12 не коррелирует с общей выживаемостью у пациентов с LUSC ( n = 494, p = 0.0056). Количество фрагментов на килобазу модели экзона на миллион картированных считываний (FPKM) гена SLFN12, которое дало максимальную разницу в выживаемости, использовали в качестве порогового значения для разделения двух когорт.

2.2. Schlafen12 изменил маркеры дифференцировки и снизил пролиферацию в клетках аденокарциномы легкого

Поскольку SLFN12 участвует в регуляции дифференцировки в других эпителиальных тканях, мы затем попытались изучить влияние сверхэкспрессии экзогенного SLFN12 на набор маркеров дифференцировки в группе клеточные линии аденокарциномы легких и плоскоклеточного рака.

Сверхэкспрессия

SLFN12 с использованием аденовирусного вектора AdSLFN12 была подтверждена вестерн-блоттингом (A). Сверхэкспрессия SLFN12 значительно снижала уровни мРНК маркера дифференцировки аденокарциномы SCGB1A1 во всех исследованных клетках LUAD (HCC827, h33 и h2075) и в одной клеточной линии LUSC (клетки h3170) по сравнению с обработкой AdCMV в качестве контроля. Экспрессия второго маркера дифференцировки аденокарциномы, SFTPC, была значительно снижена обработкой AdSLFN12 только в одной клетке LUAD (HCC827), в то время как AdSLFN12 значительно снижал уровни мРНК HOPX в двух клетках LUAD (HCC827 и h33) без значительных изменений в клетках LUSC ( Б – Г).

SLFN12 модулирует уровни мРНК маркеров дифференцировки в клетках рака легких. ( A ) Репрезентативные изображения вестерн-блоттинга подтверждают успешную сверхэкспрессию SLFN12 в клетках аденокарциномы легких (клетки HCC827, h2975 и h33) и в клетках плоскоклеточной карциномы легких (клетки h3170 и HTB-182). Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (GAPDH) использовалась в качестве контроля белка домашнего хозяйства. (ct = фоновый аденовирус AdCMV, SLF12 = AdSLFN12). Анализ мРНК с помощью кПЦР с праймером через 72 часа после обработки AdSLFN12 или AdCMV для следующих веществ: ( B ) SCGB1A1, ( C ) SFTPC, ( D ) HOPX, ( E ) CDh2, ( F ) CK-5 и ( G ) P63 в клетках HCC827, h33, h2975, h3170 и HTB-182 ( n = 3–12) (гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансфераза (HPRT) использовалась в качестве контрольного гена. , данные нормализованы к группе AdCMV, ns = несущественно, * p <0.05). Все данные представлены как среднее ± SEM. Подробную информацию о вестерн-блоттинге можно найти на Рисунке S1.

Затем мы исследовали влияние AdSLFN12 на два общих маркера дифференцировки плоскоклеточных клеток. AdSLFN12 значительно снижал экспрессию маркера плоскоклеточных клеток P63 в двух линиях клеток LUAD (HCC827 и h2975) без значительных изменений в клетках LUSC, в то время как уровень мРНК маркера плоскоклеточных клеток CK5 был значительно снижен после обработки AdSLFN12 в двух клетках LUAD. линии (клетки HCC827 и h33) и только одна линия клеток LUSC (клетки h3170) (E – G).Только одна клеточная линия LUAD (клетки h33) показала значительное увеличение экспрессии эпителиального маркера CDh2 после обработки AdSLFN12. Кроме того, мы выполнили RT-qPCR с использованием нескольких генов домашнего хозяйства (RPLP0, ACTB, B2M, POL2A), что подтвердило HPRT как стабильный ген домашнего хозяйства (рисунок S2). Более того, временной анализ уровней мРНК через 48 и 72 часа после трансфекции AdSLFN12 продемонстрировал аналогичную тенденцию в уровнях мРНК маркеров дифференцировки, как показано ранее (рисунок S3).

Поскольку эффекты SLFN12 на эти маркеры дифференцировки были несовместимы между клеточными линиями и их трудно интерпретировать, мы затем исследовали влияние сверхэкспрессии SLFN12 на пролиферацию.Экзогенная экспрессия SLFN12 с использованием AdSLFN12 значительно снижала количество клеток HCC827 через 48 часов по сравнению с клетками, инфицированными контролем AdCMV (0,67 раза ± 0,01 против 2,23 раза ± 0,26, n = 10, p <0,01, A) . Этот антипролиферативный эффект был воспроизведен в двух дополнительных клеточных линиях аденокарциномы легкого. В клетках h33 трансфекция AdSLFN12 уменьшала количество клеток, начиная с 72 часов, по сравнению с контролем AdCMV (1,50 раза ± 0,03 против 1,82 раза ± 0,06, n = 10, p <0.01, Б). В клетках h2975 количество клеток снижалось через 72 часа после трансфекции AdSLFN12 по сравнению с клетками, инфицированными контрольным AdCMV (2,96 раза ± 0,30 против 3,89 раза ± 0,41, n = 10, p <0,01, C).

Schlafen 12 снижает количество клеток в клетках аденокарциномы легких, но не в клетках плоскоклеточной карциномы легких. При аденокарциноме легких сверхэкспрессия Schlafen12 с использованием аденовирусного вектора (AdSLFN12) значительно снижает количество клеток через 72 и 96 часов после обработки AdSLFN12 по сравнению с обработкой пустым вектором (AdCMV) в следующих случаях: ( A ) HCC827, ( B ) h33 и ( C ) h2975 клеток ( n = 9–12, * p <0.05). Данные представляют собой среднее кратное изменение количества ячеек, нормализованное к количеству ячеек в ноль часов. Напротив, при плоскоклеточной карциноме легкого обработка AdSLFN12 не уменьшала количество клеток в ( D ) клетках HTB-182 ( n = 9, ns = незначительно) или ( E ) клетках h3170 ( n = 9, ns = несущественно) по сравнению с обработкой AdCMV. Данные представляют собой кратное изменение количества ячеек, нормализованное к нулю часов (* p <0,05). Все данные представлены как среднее ± SEM.

Анализ проточной цитометрии продемонстрировал сверхэкспрессию SLFN12 с использованием AdSLFN12, значительно увеличившую количество апоптотических клеток в клетках LUAD (клетки h33, HCC827 и h2975) по сравнению с контрольными клетками, трансфицированными AdCMV (фигура S4).

Кроме того, проточно-цитометрический анализ пролиферации клеток с использованием красителя для пролиферации Tag-it показал, что избыточная экспрессия SLFN12 с использованием AdSLFN12 снижает пролиферацию во всех трех клетках LUAD (клетки h33, HCC827 и h2975) по сравнению с контрольными клетками, трансфицированными AdCMV.Это дополнительно подтверждает антипролиферативный эффект SLFN12 (рисунок S5). Более того, трансфекция AdSLFN12 значительно увеличивала долю клеток, арестованных в фазе G0 / G1 по сравнению с трансфекцией AdCMV в клетках HCC827 (68,30% ± 1,19% против 50,52% ± 2,93%, n = 5, p <0,05 ), клетки h33 (62,28% ± 0,16% против 59,60% ± 0,29%, n = 6, p <0,05) и клетки h2975 (46,43% ± 3,83% против 24,50% ± 0,60%, n = 3, p <0.05), (Рисунок S6).

Напротив, инфекция AdSLFN12 не изменила количество клеток ни в одной из двух линий клеток плоскоклеточного рака. Количество клеток HTB-182, инфицированных AdSLFN12, даже через 96 часов после заражения напоминало количество клеток контрольных клеток, трансфицированных AdCMV (3,10 раза ± 0,44 против 3,29 раза ± 0,45, n = 9, p = 0,76, D ). Точно так же количество клеток h3170, трансфицированных AdSLFN12, было таким же, как количество клеток, инфицированных AdCMV, через 96 часов (3,03 раза ± 0,06 против 2,77 раза ± 0.05, n = 10, p = 0,38, E).

2.3. SLFN12 коррелирует с сигнатурой нижележащего гена MYC в аденокарциноме легкого иначе, чем плоскоклеточная карцинома легкого

Для исследования возможного механизма влияния SLFN12 на пролиферацию клеток при LUAD был проведен анализ экспрессии генной сигнатуры на двух наборах данных рака легких (набор данных 1 и набор данных 2 ), исследуя семнадцать генных модулей из ранее опубликованных и определенных сигнатур, которые описывают пути, важные для онкогенных процессов [18].Четыре генных модуля оказались по-разному коррелированными с SLFN12 в зависимости от гистологического подтипа опухоли. К ним относятся сигнатуры генов нижестоящих и связанных с MAPK, бета-катенином, Akt-mTOR и myc. В частности, в каждом наборе данных корреляция между SLFN12 и сигнатурой myc-ассоциированного гена различалась между подтипами аденокарциномы (A, C) и плоскоклеточного рака легкого (B, D). Хотя уровни корреляции не достигли статистической значимости, возможно, из-за относительно небольшого размера выборки, мы наблюдали тенденцию к отрицательной корреляции аденокарциномы в каждом наборе данных (корреляция Пирсона, набор данных 1 = -0.264, набор данных 2 = -0,3196) (A, C), в то время как мы наблюдали слабую положительную корреляцию между SLFN12 и MYC при плоскоклеточной карциноме в обоих наборах данных (корреляция Пирсона, набор данных 1 = 0,19668, набор данных 2 = 0,050284) (B , D). Полный список генов, которые коррелировали с SLFN12 при аденокарциноме легкого по сравнению с плоскоклеточным раком легкого, можно увидеть в дополнительном файле (Таблицы S1 – S3).

SLFN12 коррелирует с сигнатурами генов карциномы легких человека. Тепловая карта уровней корреляции между 17 ранее определенными сигнатурами генов, связанных с раком, с использованием двух наборов данных о пациентах с раком легких.Тепловые карты, полученные из набора данных 1, показаны в ( A ) для аденокарциномы легкого ( n = 77) и в ( B ) для плоскоклеточного рака легкого ( n = 73). Тепловые карты, полученные из набора данных 2, показаны для ( C ) аденокарциномы легкого ( n = 40) и ( D ) плоскоклеточного рака легкого ( n = 18).

Более того, биоинформатический анализ наборов данных [19,20] по аденокарциноме легкого выявляет корреляцию SLFN12 с другими известными маркерами аденокарциномы легких, такими как KRT7, Napsin A и TTF-1.SLFN12 отрицательно коррелировал с KRT-7 и положительно коррелировал с напсином-A (рисунок S7A). Поскольку корреляция SLFN12 с TTF-1, важным диагностическим маркером аденокарциномы легких, показала противоречивые результаты с использованием двух доступных зондов для анализа RNAseq, мы дополнительно выполнили RT-qPCR в трех моделях клеточных линий LUAD, изученных здесь, чтобы проанализировать уровни мРНК ТТФ-1. Наши результаты RT-qPCR показывают, что сверхэкспрессия SLFN12 значительно увеличивает уровни мРНК TTF-1 в двух из трех клеток аденокарциномы легкого (HCC827 и h2975) (рисунок S7B).

2.4. Сверхэкспрессия Schlafen12 снижает уровень белка C-Myc в аденокарциноме легкого, но не в плоскоклеточной карциноме легкого

Чтобы изучить возможный механизм действия SLFN12 на пролиферацию клеток LUAD, мы проанализировали влияние SLFN12 на c-myc в клеточных линиях ниже. учиться. Сигнатура, ассоциированная с myc, была выделена для дальнейшего изучения из-за важности пути myc в пролиферации клеток и потому, что корреляция myc-ассоциированных генов с SLFN12 различалась между LUAD и LUSC.В частности, мы выделили c-myc для дальнейшего изучения из-за важности c-myc для пролиферации клеток в целом и рака легких в частности [21].

AdSLFN12 значительно снижает уровни белка c-myc в клеточных линиях LUAD. SLFN12-инфицированные клетки HCC827 показали снижение на 27,3% ± 5,6% ( n = 6, p <0,05) через 72 часа после заражения по сравнению с пустыми векторными контролями (A), в то время как клетки h33 показали снижение на 21,0% ± 3,5%. ( n = 3, p <0.05) через 48 часов (B), а клетки h2975 показали снижение на 50,0% ± 10,6% ( n = 6, p <0,05) через 72 часа (C).

Schlafen12 снижает уровень белка c-myc, вызывая снижение пролиферации. Уровни белка c-myc проанализированы с помощью вестерн-блоттинга в ( A ) h2975 ( n = 3), ( B ) h33 ( n = 3), ( C ) HCC827 ( n = 6), ( D ) h3170 ( n = 3) и ( E ) HTB-182 ( n = 3) клетки с репрезентативными изображениями вестерн-блоттинга после обработки AdSLFN12 или AdCMV (ns = non -существенно, * p <0.05). GAPDH использовали в качестве эталонного белка. Все данные представляют собой анализ, проведенный через 72 часа после обработки AdSLFN12, за исключением того, что клетки h33 были проанализированы через 48 часов после обработки AdSLFN12, поскольку значительное уменьшение количества клеток к 72 часам препятствовало выделению белка в этот более поздний момент времени. Нижние изображения блоттинга на каждой панели представляют мечение SLFN12 для подтверждения успешной сверхэкспрессии SLFN12 на уровне белка. ( F ) Пролиферацию клеток оценивали путем окрашивания клеток h33 толуидиновым синим через 72 часа после заражения аденовирусом, экспрессирующим SLFN12 (AdSLFN12), c-myc (AdCMYC) или фоновым аденовирусом (AdCMV) в качестве контроля; данные показывают, что коэкспрессия c-myc (AdCMYC) с SLFN12 (AdSLFN12) значительно ослабляет антипролиферативный эффект AdSLFN12 (односторонний дисперсионный анализ (ANOVA), * p <0.05). Все данные представлены как среднее ± SEM. Подробную информацию о вестерн-блоттинге можно найти на Рисунке S1.

Нокдаун SLFN12 с использованием аденовирусного вектора, экспрессирующего короткую шпилечную РНК, направленную против SLFN12 (ShRNA-SLFN12), не привело к значительному изменению уровней белка c-myc в клетках h33, Hcc827 и h2975 LUDA по сравнению с аденовирусным вектором, экспрессирующим короткую шпильку, не нацеленную на РНК последовательность (shRNA-Cont) в качестве контроля (рисунок S8).

Напротив, плоские клетки легких h3170 имели экспрессию белка c-myc, которая составляла 155.6% ± 35,4% контрольных значений, трансфицированных пустым вектором, через 72 часа после трансфекции AdSLFN12 (D), в то время как в клетках HTB-182 c-myc составлял 107,9% ± 7,2% от контрольных значений через 72 часа после заражения AdSLFN12 ( n = 3, p = нс для каждого) (E).

Чтобы установить, что способность SLFN12 уменьшать количество клеток в LUAD, по крайней мере частично, обусловлена ​​его действием на снижение уровней белка c-myc, мы проанализировали количество клеток, используя окрашивание клеток толуидиновым синим после совместной экспрессии как SLFN12, так и c- myc с использованием аденовирусных векторов в клетках аденокарциномы легких h33 (мы использовали клетки h33 LUAD для этого эксперимента, потому что эта линия клеток показала наименьшую апоптотическую гибель клеток, как показано ранее).Коэкспрессия C-myc с SLFN12 в клетках h33 значительно ослабляет способность SLFN12 уменьшать количество клеток в клетках h33; Трансфекция AdSLFN12 сама по себе уменьшала количество клеток h33 до 68,84% ± 2,41% по сравнению с 81,39% ± 2,76% в клетках, трансфицированных обоими AdSLFN12 + AdC-MYC (F).

2,5. Schlafen12 снижает трансляцию белка C-Myc в клетках аденокарциномы легкого h33

Далее мы попытались исследовать механизм, с помощью которого SLFN12 регулирует уровни c-myc. Наш анализ уровня мРНК исключил ингибирование транскрипции c-myc с помощью SLFN12 (A), поскольку SLFN12 не уменьшал мРНК c-myc и действительно, по-видимому, увеличивал ее в двух из трех клеточных линий.Далее, поскольку SLFN12 регулирует ZEB1 при раке молочной железы посредством ингибирования трансляции [12], а CDX2 в эпителиальных клетках кишечника путем модуляции деубиквитилазы USP14 и UCHL5 [11], мы решили отдельно ингибировать активность протеасомы и деубиквитилазы UCHL5 / USP14, чтобы определить, блокирует способность SLFN12 уменьшать белок c-myc. Однако ни протеасомное ингибирование, ни ингибирование этих деубиквитилаз не блокировало SLFN12-регуляцию c-myc (B – E).

Schlafen 12 снижает трансляцию белка c-myc.( A ) Уровни мРНК C-myc, проанализированные с помощью праймер-зонда RT-qPCR в клетках LUAD HCC827 ( n = 6), h33 ( n = 6) и H-1975 ( n = 6) , 72 часа после обработки AdSLFN12 или AdCMV. HPRT использовался в качестве эталонного гена, и данные были нормализованы для контроля AdCMV (* p <0,05, нс = незначимо). Уровни белка C-myc проанализированы с помощью вестерн-блоттинга в ( B ) h2975 ( n = 3), ( C ) h33 ( n = 3) и ( D ) HCC827 ( n = 6) клетки с репрезентативными изображениями вестерн-блоттинга, показанными в ( E ), через 72 часа после заражения AdSLFN12 или контролем AdCMV в присутствии 10 мкМ протеасомного ингибитора MG132 или 1 мкМ ингибитора деубиквитилазы b-AP15 (* р <0.05, GAPDH используется в качестве эталонного белка). ( F , G ) Трансляция белка C-myc в клетках h33 ( n = 3) через 68 часов после обработки AdSLFN12 или контролем AdCMV, выполненная реакцией Click-iT метаболического мечения L-AHA вновь синтезированных ( зарождающийся) белок c-myc (зеленый) после иммунопреципитации общего белка c-myc (красный). Образующийся белок c-myc (зеленый) был нормализован к общему количеству иммунопреципитированного c-myc (красный), и все данные затем нормализованы к контрольным значениям AdCMV (* p <0.05). Все данные представлены как среднее ± SEM. Подробную информацию о вестерн-блоттинге можно найти на Рисунке S1.

В свете этих результатов мы затем обратили наше внимание на возможность того, что SLFN12 может модулировать трансляцию белка c-myc. Действительно, анализ трансляции белка c-myc с использованием метаболического мечения L-AHA и химии Click-iT показал, что сверхэкспрессия SLFN12 посредством трансфекции AdSLFN12 клеток h33 значительно снижает трансляцию c-myc на 55% по сравнению с контрольными клетками, трансфицированными пустым вектором, контрольным AdCMV. (F, G).

3. Обсуждение

Немелкоклеточный рак легкого подразделяется на аденокарциному (LUAD) и плоскоклеточный рак (LUSC) [3]. Это исследование идентифицировало SLFN12 как прогностически благоприятное при LUAD, но не при LUSC. Хотя ранее было показано, что SLFN12 регулирует дифференцировку в других типах эпителиальных клеток [11,12,13], SLFN12 изменяет уровни мРНК маркеров дифференцировки (SCGB1A1, SFTPC, HOPX, CDh2, CK-5 и P63) сложным и непоследовательным образом. мода среди клеточных линий LUAD и LUSC.Тем не менее, SLFN12 имел тенденцию по-разному коррелировать с сигнатурами генов, связанных с myc, между аденокарциномами легких человека и плоскоклеточными карциномами легких человека, в то время как SLFN12 снижал как уровни белка c-myc, так и пролиферацию клеток только в клеточных линиях аденокарциномы легких, без аналогичных эффектов в LUSC. SLFN12 действует в клетках LUAD, уменьшая трансляцию белка c-myc.

Schlafens – это группа генов, которые экспрессируются у разных видов, включая людей и грызунов. Шлафены делятся на короткие, средние и длинные семейства в зависимости от их размера и структуры.Однако люди экспрессируют только длинные (SLFN5, SLFN11, SLFN12, SLFN13, SLFN14) шлафены и один промежуточный шлафен, которым является SLFN12. Шлафены играют разнообразные роли в дифференцировке клеток, пролиферации и созревании иммунных клеток, а также в раке [22,23]. Роль Schlafens при раке легких изучена недостаточно. Сообщалось, что высокая экспрессия SLFN5 или SLFN11 является прогностически благоприятной для рака легких [24,25], и, в частности, сообщалось, что SLFN11 сенсибилизирует клетки рака легких к ДНК-алкилирующим агентам и ингибиторам поли-АДФ-рибозо-полимеразы (PARP) [ 8,24].Однако было обнаружено, что SLFN5 активирует ось эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) в клетках A549, что, как можно ожидать, усиливает метастатический потенциал [6]. Кроме того, SLFN11 и SLFN5 представляют собой длинные шлафены, которые обладают сигналом ядерного импорта и предполагаемым доменом РНК-геликазы и связываются непосредственно с хромосомной ДНК. Напротив, промежуточный SLFN12 лишен таких последовательностей и локализован в цитоплазме [11,26]. Следовательно, не обязательно ожидать, что SLFN12 будет действовать таким же образом, как и длинные белки Шлафена.SLFN12 вызывает дифференцировку в энтероцитах, при раке простаты и раке груди [12,13,27]. По-видимому, он действует в цитозоле, модулируя трансляцию и деградацию факторов транскрипции, которые, в свою очередь, изменяют фенотип клетки [11,12]. SLFN12 также сенсибилизирует раковые клетки, включая рак легких, к ингибиторам PDE3A [28,29]. Наш анализ идентифицировал SLFN12 как благоприятный прогностический фактор при раке легких, но, что более важно, стратифицировал эту корреляцию выживаемости по гистологическому подтипу.Прогностические последствия экспрессии SLFN12 кажутся исключительными для аденокарциномы легких и не применимы к плоскоклеточной карциноме. Хотя данные плоттера KM и данные Атласа генома рака не являются полностью независимыми, мы использовали их для изучения влияния SLFN12 на биологию рака легких человека. Анализ метаданных из этих наборов данных показывает, что существует только 8% -ное совпадение в образцах рака легких между этими двумя наборами данных. Кроме того, данные KM Plotter были сгенерированы с использованием массива Affymetrix HT Human Genome U133A [9], тогда как профили транскриптов Human Protein Atlas были созданы с помощью секвенирования мРНК (RNA-Seq), выполненного на машинах Illumina HiSeq2000 / 2500 (Illumina, San Diego , CA, США), используя стандартный протокол RNA-Seq с длиной чтения 2 × 100 оснований [10].Такие разные методологии нередко дают разные результаты. Таким образом, получение аналогичных результатов с участием SLFN12 в прогнозе аденокарциномы легких человека из обоих наборов данных подтверждает и усиливает строгость нашего вывода о том, что SLFN12 является прогностически важным для этих опухолей.

Наши результаты не только указывают на прогностическое значение SLFN12 при LUAD, но также предполагают, что SLFN12 и его последующие эффекторы могут быть полезными мишенями для будущего дизайна точной медицины аденокарциномы легкого.Хотя мы сосредоточились здесь на аденокарциноме и плоскоклеточном раке легкого, было бы интересно изучить влияние SLFN12 на выживаемость при крупноклеточном и мелкоклеточном раке легкого, но доступные нам базы данных не содержали достаточного размера выборки для выполнения таких анализов. .

Поскольку мы знали, что SLFN12 изменяет дифференцировку клеток, мы первоначально искали объяснение очевидных защитных последствий высокой экспрессии SLFN12 при аденокарциноме легких, исследуя экспрессию нескольких важных маркеров дифференцировки.CK-5 и P63 были выбраны, потому что они оба являются маркерами плоскоклеточного рака [3,30], а SFTPC, SCGB1A1 и HOPX являются маркерами LUAD [31], в то время как CDh2 был выбран, потому что было продемонстрировано, что SLFN12 модулирует экспрессию CDh2. при раке простаты и груди [12,13]. Хотя SLFN12 имел тенденцию изменять уровни мРНК SCG1A1, SFTPC, HOPX, CDh2, CK-5 и P63, эти изменения не были сопоставимы среди всех протестированных клеточных линий. Вдобавок эти наблюдения не объясняли анализ клинической выживаемости.SGB1A1, SFTPC и HOPX все коррелируют с лучшей выживаемостью при аденокарциноме легких [32,33,34,35], в то время как наши результаты показали снижение мРНК таких маркеров в большинстве клеток. И CK-5, и P63 являются маркерами плоскоклеточного рака легких [3]. Наши данные по мРНК продемонстрировали отсутствие изменений в p63 с уменьшением CK-5 в одной клеточной линии, моделирующей LUSC. Интересно, что SLFN12 значительно увеличивал уровни мРНК TTF-1 в двух линиях клеток LUAD. Такие результаты согласуются с концепцией, что SLFN12 является прогностически благоприятным при аденокарциноме легкого, поскольку более высокие уровни TTF-1 связаны с благоприятным прогнозом при неплоскоклеточном НМРЛ [8].Наши данные по мРНК ждут дальнейшего изучения на уровне белков, особенно потому, что SLFN12 также может регулировать некоторые белки посттранскрипционно [11,12]. Однако, поскольку данные по экспрессии мРНК, по-видимому, явно не объясняют разницу в эффекте SLFN12 на выживаемость между LUAD и LUSC, мы выполнили анализы пролиферации клеток на одних и тех же моделях клеток. Действительно, сверхэкспрессия SLFN12 последовательно снижает пролиферацию клеток LUAD, не затрагивая клетки LUSC, что согласуется с анализом выживаемости человека.Этот антипролиферативный эффект SLFN12 был дополнительно подтвержден с помощью анализа пролиферации клеток Tag-it и отслеживающего красителя и анализа проточной цитометрии, который подтвердил фактическое снижение пролиферации в сочетании с остановкой клеточного цикла с меньшим количеством клеток, вступающих в митотическую фазу, что дополнительно поддерживает снижение пролиферации, вызванное SLFN12. сверхэкспрессия. Интересно, что сверхэкспрессия SLFN12 увеличивала количество апоптотических клеток во всех трех протестированных моделях клеток LUAD. Хотя сообщалось, что нокдаун c-myc вызывает апоптоз в клетках рака легких [36], все еще необходимо определить, индуцирует ли SLFN12 апоптоз через путь c-myc или другой независимый путь.

Анализ экспрессии генов двух наборов данных рака легких человека выявил корреляцию SLFN12 с разными сигнатурами генов. Важно отметить, что корреляция SLFN12 с сигнатурами генов MYC, AKT-mTOR, MAPK и бета-катенина различалась между LUAD и LUSC. Принимая во внимание дифференциальный эффект выживаемости SLFN12 в LUAD, но не в LUSC в двух других базах данных, эти результаты позволяют предположить, что роль SLFN12 в раке легких может быть специфичной для гистологического подтипа и неодинакова для всех видов рака легких.Из этих дифференциально коррелированных сигнатур генов мы выбрали c-myc для дальнейшего изучения из-за дифференциальной корреляции с сигнатурами гена myc-downstream и роли c-myc в клеточном цикле и пролиферации [37].

C-myc – это транскрипционный фактор, который отвечает за пролиферацию, дифференцировку, апоптоз и созревание клеток посредством регуляции множества генов [38,39,40,41]. C-myc был установлен как онкоген, который связан с плохим прогнозом и агрессивным поведением при различных формах рака [41,42] и, в частности, способствует пролиферации клеток рака легких [39,43].Действительно, c-myc был предложен в качестве терапевтической мишени для НМРЛ или в качестве предиктора таргетной химиотерапии [44,45]. Наш протеомный анализ продемонстрировал дифференциальную экспрессию генов в LUAD по сравнению с LUSC, а дальнейший анализ показал, что корреляция между экспрессией SLFN12 и c-myc была различной в LUAD и LUSC. Поэтому мы выделили c-myc для дальнейшего исследования как возможную причину различного влияния SLFN12 на выживаемость и пролиферацию клеток при LUAD по сравнению с LUSC. Сверхэкспрессия SLFN12 снижает уровни белка c-myc в LUAD, но не в случае LUSC.Этот эффект SLFN12 соответствовал результатам нашего анализа выживаемости, исследования пролиферации клеток и протеомного анализа.

Снижение уровня белка c-myc с помощью SLFN12 способствует его способности ингибировать пролиферацию клеток, хотя SLFN12 может также регулировать пролиферацию LUAD другими способами, поскольку коэкспрессия белка c-myc ослабляет, а не полностью блокирует влияние SLFN12 на количество клеток. . Это указывает на то, что изменения в c-myc являются одной из осей, посредством которых SLFN12 проявляет свое действие, тогда как др. Нижестоящие цели SLFN12 ждут будущих исследований.

Хотя ранее сообщалось, что SLFN12 действует через модуляцию протеасомной активности и активности деубиквитилазы USP14 и USCHL5 [11], в клетках аденокарциномы легких этого не наблюдалось. Вместо этого SLFN12 действует путем ингибирования трансляции белка c-myc, подобно тому, как SLFN12 модулирует экспрессию ZEB1 при раке груди [12]. Это трансляционное ингибирование c-myc с помощью SLFN12 предполагает новый потенциальный путь для будущего нацеливания c-myc на аденокарциному легкого.

Хотя мы наблюдали, что сверхэкспрессия SLFN12 снижает c-myc, снижение SLFN12, напротив, не приводит к значительному увеличению белка c-myc.Это несоответствие можно объяснить по-разному. Во-первых, хотя в этих экспериментах SLFN12 был восстановлен, он не был полностью устранен. Таким образом, остаточного SLFN12 могло быть достаточно для активации SLFN12-опосредованных путей. Во-вторых, и наоборот, базальные уровни SLFN12 в этих раковых клетках уже довольно низкие. Таким образом, возможно, что избыточная экспрессия SLFN12 может иметь эффект, в то время как базального SLFN12 просто недостаточно, чтобы оказывать значительное влияние на c-myc без или с дальнейшим сокращением с помощью shRNA.В-третьих, SLFN12, по-видимому, снижает c-myc на уровне трансляции, но не на уровне транскрипции. Таким образом, если c-myc уже транслируется с максимальной скоростью на исходном уровне в этих клетках, снижение SLFN12 может не вызывать дальнейшего увеличения трансляции c-myc. В-четвертых, уменьшение SLFN12, несомненно, влияет на белки, отличные от c-myc, которые, вероятно, взаимодействуют с транскрипцией, трансляцией и деградацией c-myc. Таким образом, изменение сигнальной сети в разных направлениях может иметь сложные и не обязательно противоположные эффекты.Различение этих разрозненных и сложных возможностей требует дальнейшего изучения, выходящего за рамки данной рукописи.

Вопрос о том, как SLFN12 влияет на прогноз и почему он отличается при аденокарциноме от плоскоклеточного рака, требует дальнейшего изучения. Наши результаты повышают вероятность того, что SLFN12 может действовать при аденокарциноме, по крайней мере частично, за счет воздействия на c-myc и его нисходящие сигналы, но SLFN12 может влиять на множество факторов транскрипции [11,12] и взаимодействие между ними и их последующие эффекты. вероятно будет сложным.Хотя аденокарцинома легкого и плоскоклеточный рак легкого происходят из одного и того же органа, их биология опухоли и реакция на терапию во многих отношениях явно различаются [46, 47], и поэтому не обязательно ожидать, что один и тот же стимул будет действовать. имеют одинаковые эффекты в этих очень разных типах опухолей.

В настоящее время не существует проверенного терапевтического препарата, который специфически воздействует на экспрессию SLFN12, так как до наших текущих исследований не было особых предположений о том, что SLFN12 играет важную роль при раке.Очевидно, что на это потребуется время. Однако было идентифицировано недавно запатентованное соединение специфического ингибитора PDE3A (DNMDP), которое, по-видимому, индуцирует апоптоз в наборе раковых клеток NCI-60, включая клетки рака легких, путем усиления взаимодействия PDE3A с SLFN12. DNMDP работает только в раковых клетках, которые демонстрируют высокую экспрессию SLFN12 [5]. Эта молекула может быть полезна для лечения аденокарциномы легких, которые экспрессируют высокие уровни SLFN12, но это требует дальнейших исследований. Однако даже в отсутствие специфического лекарственного средства для воздействия на опухоли на основе их уровней SLFN12, способность разделять пациентов с раком легких на высокую и низкую экспрессию SLFN12 может помочь в прогнозировании прогноза и последующей агрессивности химиотерапии.С одной стороны, наши данные повышают вероятность того, что аденокарциномы легких с более высокой экспрессией SLFN12 могут вести себя менее агрессивно и, таким образом, могут поддаваться менее агрессивному цитотоксическому режиму. С другой стороны, в будущих исследованиях могут быть разработаны препараты, нацеленные на активацию SLFN12-опосредованного пути, которые могут быть полезны при аденокарциномах легких, которые экспрессируют низкие уровни SLFN12. Наконец, поскольку SLFN12, по-видимому, влияет на многие различные аспекты клеточной биологии, остается возможным, что даже более традиционная химиотерапия может иметь разные эффекты в опухолях, которые экспрессируют высокие или низкие уровни SLFN12.Только разделив пациентов на группы с высокой и низкой экспрессией SLFN12, мы сможем различить различия в реакции в будущих химиотерапевтических исследованиях.

Поскольку прямое нацеливание c-myc при раке является сложной задачей из-за плейотропии его транскрипции, непрямое нацеливание c-myc является потенциальным терапевтическим подходом [48]. SLFN12 и его нижестоящие сигналы могут предлагать другой потенциальный путь нацеливания на c-myc при раке путем регулирования его экспрессии.

4.Материалы и методы

4.1. Анализ выживаемости

Анализ выживаемости проводился с использованием двух различных общедоступных онлайн-инструментов. Первый анализ был выполнен с использованием плоттера Каплана Мейера с сайта www.kmplot.com на основе генов Affymetrix [14,15]. В общей сложности 719 пациентов с LUAD и 524 пациента с LUSC были разделены на две группы на основе средних значений экспрессии SLFN12 (175 было пороговым значением для LUAD и 140 было пороговым значением экспрессии SLFN12 в LUSC), а общая выживаемость составила сравнивали между двумя когортами пациентов с помощью графика выживаемости Каплана – Мейера, а также отношения рисков с 95% доверительными интервалами с расчетом logrank p -значения.

Второй анализ выживаемости был проведен с использованием Human Protein Atlas (http://www.proteinatlas.org) [16,17], который основан на анализе RNA-Seq, где были сгруппированы 500 пациентов с LUAD и 494 пациента с LUSC. на две когорты на основе наилучшего отсечения (количество фрагментов на килобазу модели экзона на миллион отображенных считываний) значения FPKM для SLFN12, которое дало лучшее разделение общей выживаемости после диагностики (2,25 и 1,57 использовались в качестве значений отсечки для SLFN12 FPKM для LUAD и LUSC соответственно).Было рассчитано значение Logrank p для графика Каплана – Мейера.

4.2. Клетки и реагенты

Все клетки были получены из Американской коллекции культур тканей (АТСС). Клетки HCC827, h33 и h2975 использовали в качестве модели аденокарциномы легкого (LUAD), тогда как клетки h3170 и HTB-182 использовали для моделирования плоскоклеточного рака легкого (LUSC).

Клетки культивировали в среде RPMI-1940 (Genesee Scientific, Эль-Каджон, Калифорния, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) (Genesee Scientific) и 5% пенициллина / стрептомицина (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). ) с 5% CO 2 при 37 ° C.MG132 и b-AP15 были получены от selleckchem (Мюнхен, Германия).

4.3. Вирусные конструкции

AdSLFN12 (Applied Biological Materials, Ричмонд, Британская Колумбия, Канада) был сконструирован с использованием вектора pAdeno и вставки человеческого SLFN12 (номер доступа {“type”: “entrez-нуклеотид”, “attrs”: {“text”: «NM_018042», «term_id»: «1677530637», «term_text»: «NM_018042»}} NM_018042) в сочетании с промотором CMV. Контрольный вирус был сконструирован из вектора pAdeno только с промотором CMV. Аденовектор короткой шпилечной РНК, нацеленный на SLFN12, был получен от Vector Biolab (Malvern, PA, USA, # shADV-223642).Аденовирус C-Myc был получен от Vector Biolabs (Малверн, Пенсильвания, США, №1285).

4.4. Вирусная трансфекция

От семидесяти до восьмидесяти процентов конфлюэнтных клеток в шестилуночных планшетах трансдуцировали в количестве 2000–4000 вирусных частиц на клетку вирусом AdSLFN12, AdC-MYC, Ad-ShRNA-SLFN12 или AdCMV, Ad-Sh-Scr в качестве контроля. в течение 24 часов в 1 мл полной среды RPMI-1940. Через двадцать четыре часа культуральную среду заменяли свежей средой RPMI, и клеткам давали возможность расти в течение 72–96 часов в соответствии с протоколом исследования.

4.5. Жизнеспособность клеток

Жизнеспособность клеток оценивали с использованием водорастворимой соли тетразолия (Dojindo Molecular Technology, Роквилл, Мэриленд, США). Вкратце, клетки высевали по 5000 клеток на лунку в 96-луночных планшетах в четырех повторностях. Клеткам давали возможность прикрепиться при 37 ° C в течение 24 часов. Затем клетки инфицировали аденовирусными векторами из расчета 2000–4000 вирусных частиц на клетку. Жизнеспособность клеток измеряли серийно через 0 и 96 часов после трансфекции в каждом планшете. Во время измерений на лунку добавляли 100 мкл свежей среды с 10% раствором CCK8 и инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов в соответствии с рекомендациями производителя.Поглощение измеряли на спектрофотометре BioTeck Epoch (Winooski, VT, USA) при 450 нм.

Анализ количества клеток с толуидиновым синим проводили путем высева 25000 клеток на лунку в 24-луночных планшетах в трех экземплярах. Клеткам давали возможность прикрепиться при 37 ° C в течение 24 часов, а затем инфицировали аденовирусными векторами из расчета 4000 вирусных частиц на клетку. Количество клеток измеряли через 0 и 72 часа после заражения. Клетки дважды промывали забуференным фосфатом физиологическим раствором, фиксировали охлажденным на льду метанолом при -20 ° C в течение 20 минут и окрашивали 1% толуидиновым синим в течение 45 минут при комнатной температуре.Затем клетки промывали бидистиллированной водой и оставляли сушиться на воздухе в течение 2 часов. Клетки солюбилизировали 1% раствором SDS, и оптическую плотность измеряли с помощью многомодового микропланшетного ридера Spark ® от Tecan (Männedorf, Швейцария) при 620 нм.

4.6. Исследования РНК и КПЦР

Полное выделение РНК из клеток было достигнуто с использованием набора RNeasy Mini Kit, Qiashredders, обработки ДНКазой и прибора QiaCube в соответствии с протоколами производителя (Qiagen, Hilden, Германия).Синтез кДНК выполняли с использованием набора для обратной транскрипции SMARTScribe (Takara Clontech # 639538, Mountain View, CA, USA) в соответствии с протоколом производителя. Образцы кДНК анализировали с помощью кПЦР с помощью системы обнаружения ПЦР в реальном времени BioRad CFX96 Touch и мастер-смеси для экспрессии генов PrimeTime от компании Integrated DNA Technology (IDT, Коралвилл, Айова, США) в соответствии с планом эксперимента. Уровни экспрессии определяли по значениям порогового цикла (Ct) с использованием метода 2-∆∆Ct с использованием HPRT в качестве контрольных генов.Условия цикла qPCR для праймерного зонда. qPCR: 1 цикл по 2 минуты при 95 ° C и 50 циклов по 10 секунд при 95 ° C и 45 секунд при температуре отжига 55 ° C. Праймеры были получены от Integrated DNA Technology (IDT). Набор последовательностей праймеров / зондов, используемых в этом исследовании, был следующим:

HPRT; прямой праймер: TTGTTGTAGGATATGCCCTTGA, обратный GCGATGTCAATAGGACTCCAG, зонд / 5HEX / AGCCTAAGA / ZEN / TGAGAGTTCAAGTTGAGTTTGG / 3IABkFQ /.

B2M; прямой праймер: GGACTGGTCTTTCTATCTCTTGT, обратный ACCTCCATGATGCTGCTTAC, зонд / 5HEX / CCTGCCGTG / ZEN / TGAACCATGTGACT / 3IABkFQ /.

ACTB; прямой праймер: ACAGAGCCTCGCCTTTG, обратный CCTTGCACATGCCGGAG, зонд / 5HEX / TCATCCATG / ZEN / GTGAGCTGGCGG / 3IABkFQ /.

ПОЛР2А; прямой праймер: CAGTTCGGAGTCCTGAGTC, обратный TCGTCTCTGGGTATTTGATGC, зонд / 5HEX / ACTGAAGCG / ZEN / AATGTCTGTGACGGAG / 3IABkFQ /.

TP63: Вперед: CAAGAAACGAAGATCCCCAGA, назад: GAGGAAGGTACTGCATGAGTTC, probe / 5Cy5 / TCACGGCCCCTCACTGGTAAGTAT / 3IAbRQSp /.

SFTPC: Вперед: GATGGTTCTGGAGATGAGCA, назад: CTGGCTTGTAGGCGATCAG, зонд / 56-FAM / ATGGAGAAG / ZEN / GTGGCAGTGGTAACC / 3IABkFQ /.

HOPX: Вперед: GCAAACACAGCTTCCAAACC, назад: CTCCGCTAGACCCTTCTCA, зонд: / 5Cy5 / TGCCTCTTCCACACTAATGACAGACTG / 3IAbRQSp /.

CDh2: Вперед: GTCTGTCATGGAAGGTGCTC, назад: CTGAGGATGGTGTAAGCGATG, зонд: / 56-FAM / AGACGCGGA / ZEN / CGATGATGTGAACAC / 3IABkFQ /.

C-Myc: Вперед: TCTTCCTCATCTTCTTGTTCCTC, обратный: TCCTCGGATTCTCTGCTCTC, зонд: / 5Cy5 / TGGGCGGTGTCTCCTCATGG / 3IAbRQSp /.

TTF-1: Вперед: CAGACTTACTCCAAGCACCA, назад: TTGGGAATGACTGGAAGACG, зонд: / 5Cy5 / CTACTTCGGGCCACCATCTCACC / 3IAbRQSp /.Ck-5 был получен от BIO-RAD (каталожный № 10031234), и последовательность является частной.

4.7. Вестерн-блоттинг

Клетки высевали в шестилуночные планшеты по 300000 клеток / лунку. На следующий день клетки инфицировали либо AdSLFN12, либо AdCMV в качестве контроля. Через 24 часа культуральную среду заменяли свежей средой RPMI с добавлением 10% FBS и 5% пенициллина / стрептомицина. Клеткам давали возможность расти в течение 48-72 часов после трансфекции, а затем лизировали в буфере для лизиса для анализа радиоиммунопреципитации (RIPA) с добавлением ингибиторов протеазы Halt (ThermoFisher Scientific).Белок лизата количественно определяли с использованием анализа белка бицинхониновой кислоты (ThermoFisher Scientific, # 87786). Затем 30 мкг белка загружали в гель-электрофорез 10% SDS-page, который разделяли напряжением 120 В, а затем переносили на 0,2 мкм нитроцеллюлозные мембраны с использованием буфера для переноса трис-глицина с добавлением 20% метанола при 4 ° C в течение 18 часов. с 32 В. Мембраны блокировали блокирующим буфером Odyssey (LI-COR, Lincoln, NE, USA) в течение одного часа при комнатной температуре с последующей инкубацией в течение ночи при 4 ° C со следующими первичными антителами: моноклональные анти-c-myc, повышенные в кролик (Cell Signaling Technology, Дэнверс, Массачусетс, США, # 5605), моноклональные антитела против GAPDH, полученные у мышей (Meridian Life Science, Мемфис, Теннесси, США), и моноклональные антитела против Schlafen12, полученные у кроликов (Abcam, Кембридж, Массачусетс, США), США, # ab234418).Мембраны трижды промывали в трис-буферном физиологическом растворе с 0,1% буфером Tween (TBS-T) в течение 5 минут каждую и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с соответствующими вторичными антителами: ослиным антимышиным CW800 и ослиным анти-кроличьим RD680 (LI -COR) с последующими тремя пятиминутными промывками в буфере TBS-T. Мембраны сушили в течение 1 часа и отображали на аппарате LI-COR CLX. Данные анализировали с помощью Image Studio v2.5 (LI-COR).

4.8. Click-iT Transation Assay

Клетки высевают в 100-миллиметровую чашку на 2.5 миллионов клеток / блюдо. На следующий день клетки трансфицировали либо AdSLFN12, либо AdCMV в качестве контроля и инкубировали в течение 60 часов при 37 ° C с 5% CO 2 . Затем клетки дважды промывали, инкубировали с RPMI без метионина в течение 1 часа, а затем инкубировали с 50 мкМ L-AHA в течение 6 часов в среде RPMI без метионина с добавлением 10% FBS. Клетки лизировали в буфере для лизиса (50 мМ TrisHCL, 150 мМ NaCl, 1% Triton X-100) и инкубировали с 500 мкМ EZ-Link Phosphine-PEG3-Biotin (ThermoFisher Scientific, # 88901) в течение 6 часов при 37 ° C с легкое возбуждение.C-myc иммунопреципитировали с использованием моноклонального антитела (Cell Signaling Technology, # 5605) и магнитных шариков (Bio-Rad, Hercules, CA, USA, # 1614013) в соответствии с протоколом производителя. Элюированный белок разделяли с использованием 10% SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Биотин метили стрептавидином IRDye 800CW (LI-COR, # 926–32230), а c-myc метили вторичными антителами осла против кроличьих IgG IRDye 680LT. Изображения были получены с использованием LI-COR-Clx и проанализированы с помощью Image Studio (LI-COR).

4.9. Вычисление показателя экспрессии и сигнатуры гена

Мы получили необработанные данные из двух общедоступных баз данных, набора данных 1 ( n = 150; LUAD = 77, LUSC = 73) [19] и набора данных 2 ( n = 58; LUAD). = 40, LUSC = 18) [20], получено из GEO или ArrayExpress и нормализовано с помощью пакета R Affy. Чтобы определить функциональность SLFN12, мы вычислили корреляцию между оценками генов SLFN12 с нашими ранее опубликованными и функционально известными сигнатурами генов [18]. Для вычисления оценок генной сигнатуры мы применили тот же метод, который описан ранее в Ignatiadis M et al.[18] на основе средневзвешенного значения. Оценка каждого модуля была масштабирована в рамках исследования так, чтобы квантили 2,5% и 97,5% равнялись +1 и -1, соответственно. Весь анализ был выполнен с использованием R / Bioconductor (www.r-project.org). Кроме того, корреляция SLFN12 с наборами специфических генов была исследована как в LUAD, так и в LUSC.

4.10. Проточная цитометрия

4.10.1. Апоптоз

Всего 300000 клеток высевали на лунку в шестилуночные планшеты. На следующий день клетки инфицировали AdSLFN12 или AdCMV.Через 72 часа клетки обрабатывали трипсином и собирали. Апоптозные клетки детектировали с использованием набора для обнаружения апоптоза аннексина V Pacific Blue ™ с ИП (BioLegend, # 640928, Сан-Диего, Калифорния, США) в соответствии с протоколом производителя. Образцы собирали на проточном цитометре BD FACSymphony A3 (BD, Сан-Хосе, Калифорния, США) и анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (TreeStar, Ashland, OR, США).

4.10.2. Клеточная пролиферация

Шесть миллионов клеток инкубировали с 1 мл фосфатно-солевого буфера (PBS), содержащего 5 мкМ фиолетового красителя Tag-IT (BioLegend, # 425101), в течение 30 минут при 37 ° C, после чего пять миллилитров среды RPMI с 10 % FBS добавляли для прекращения реакции, и клетки центрифугировали при 1200 об / мин в течение 5 минут.Клетки ресуспендировали в свежей среде RPMI и высевали в шестилуночные планшеты при плотности 300000 клеток на лунку. На следующий день клетки голодали по сыворотке в течение шести часов путем инкубации в бессывороточной среде RPMI, а затем инфицировали AdSLFN12 или контрольным AdCMV. Через 24 часа после заражения среду заменяли свежей средой. Через 72 часа после заражения клетки обрабатывали трипсином и собирали в пробирки Falcon (Corning, # 352058, Glendale, AZ, USA) в 1000 мкл буфера для сортировки клеток, активируемых флуоресценцией (FACS) (PBS + 5% FBS).Образцы собирали на проточном цитометре BD FACSymphony A3 (BD) и анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (TreeStar).

4.10.3. Клеточный цикл

Всего 300000 клеток высевали на лунку в шестилуночные планшеты. На следующий день клетки голодали путем инкубации в бессывороточной среде RPMI в течение 6 часов. Затем клетки инфицировали AdSLFN12 или AdCMV. Через 72 часа клетки трипсинизировали и инкубировали с 5 мкМ красителя Vybrant cycler green (Thermo Fisher Scientific, # V35003) в течение 30 минут при 37 ° C в темноте.Образцы собирали на проточном цитометре BD FACSymphony A3 (BD) и анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (TreeStar).

(PDF) Проблемы здоровья молодых женщин: раскрытие парадокса

Проблемы здоровья молодых женщин

647

План Ка, Э. Б. (1997). Восприятие женщинами опыта подросткового возраста. Подростковый возраст,

32 (127), 715–734.

Кинг, А. Дж. К., Бойс, В. Ф., и Кинг, М. А. (1999). Тенденции в состоянии здоровья канадской молодежи.

Отт ава: Министерство здравоохранения Канады.

Левинсон, Д. Дж. (1996). Времена года в жизни женщины. Нью-Йорк: Кнопф.

Линкольн, Ю.С., и Губа, Э.Г. (1985). Натуралистическое исследование. Беверли-Хиллз, Калифорния: Сейдж.

Общество Центра Маккрири (1993). Исследование здоровья подростков: отчет для столицы Re –

gion Британской Колумбии. Ричмонд, Британская Колумбия: New Leaf Computer Publishing and Printing

Corporation.

Морган Д. Л. (1984). Фокус-группы: новый инструмент для качественного исследования. Качественный

Социология, 7 (3), 243–269.

Ньяма Тхи, А., и Шулер, П. (1990). Интервью в фокус-группе: методика исследования

, улучшающая практику медперсонала. Journal of Advanced Nursing, 15, 1281–1288.

Пайфер М. (1995). Возрождение Офелии: спасение юных женщин. Нью-Йорк:

Bal lantine Books.

Purdey, A. F., Adhikari, G. B., Robinson, S. A., & Cox, P. W. (1994). Совместное

Развитие здравоохранения в сельских районах Непала: прояснение процесса расширения прав и возможностей сообществ –

мент.Ежеквартальное образование в области здравоохранения, 21 (3), 329–343.

Rose nthal, S. L., Lewis, L. M., & Cohen, S. S. (1996). Проблемы, связанные с принятием сексуальных

решений девочек подросткового возраста из городских районов. Подростковый возраст, 31 (123), 731–739.

Samps elle, К. М., Бернхард, Л., Керр, Р. Б., Опи, Н., Перли, М. Дж., Питцер, М. (1992). Vi-

насилие в отношении женщин: масштаб и значение проблемы. В С. М. Сампселле

(ред.), Насилие в отношении женщин: медсестринские исследования, образование и практические вопросы.New

York: Hemisphere Publishing.

Schwar tz, H., & Jacobs, J. (1979). Качественная социология. Нью-Йорк: Свободная пресса.

Си-л, Д. В., Богарт, Л. М., & Эрхард, А. А. (1998). Динамика малых групп: возможность

дискуссий в фокус-группах как метод исследования. Групповая динамика: теория, исследования,

и практика, 2 (4), 253–266.

Спрэдли, Дж. П. (1979). Этнографическое интервью. Нью-Йорк: Холт, Райнхарт и Уинстон.

Спрэдли, Дж. П. (1980). Включенное наблюдение. Нью-Йорк: Холт, Райнхарт и Уинстон.

Статистика Канады (1995). Женщины в Канаде. Статистический отчет. Каталожный № 89-503Е

(3-е изд.). Оттава, Онтарио: министр промышленности.

Us miani, S., & Daniluk, J. (1997). Матери и их дочери-подростки: Взаимоотношения

между самооценкой, гендерно-ролевой идентичностью и телесным образом. Журнал молодежи и

Подростковый возраст, 26 (1), 45–62.

Ус шер, Дж. М. (1989). Психология женского тела. Лондон: Рутледж.

Уокер, Л. Э. (1979). Избитая женщина. Нью-Йорк: Харпер и Роу.

Уилкинсон, С. (1998). Фокус-группы по исследованию здоровья: изучение значений здоровья

и болезни. Журнал психологии здоровья, 3 (3), 329–348.

Вольф, Н. (1990). Миф о красоте. Торонто: Случайный дом Канады.

Йодер, Дж. Д. и Кан, А. (1993). Работа над инклюзивной психологией женщин.

Американский психолог, 48 (7), 846–950.

Апоптотическая передача сигналов c-MYC | Онкоген

  • Adams JM, Harris AW, Pinkert CA, Corcoran LM, Alexander WS, Cory S et al . (1985). Онкоген c-Myc, управляемый усилителями иммуноглобулина, индуцирует лимфоидную злокачественность у трансгенных мышей. Природа 318 : 533–538.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • Адамс Дж. М., Харрис А. В., Штрассер А., Огилви С., Кори С.(1999). Трансгенные модели лимфоидной неоплазии и развитие пангематопоэтического вектора. Онкоген 18 : 5268–5277.

    CAS PubMed Google ученый

  • Adrain C, Martin SJ. (2006). Клеточная биология: двойной нокаутирующий удар по каспазам. Наука 311 : 785–786.

    CAS PubMed Google ученый

  • Аманулла А, Либерманн Д.А., Хоффман Б.(2000). p53-независимый апоптоз, связанный с c-Myc-опосредованным блоком дифференцировки миелоидных клеток. Онкоген 19 : 2967–2977.

    CAS PubMed Google ученый

  • Аманулла А, Либерманн Д.А., Хоффман Б. (2002). Нарушение регуляции c-Myc преждевременно задействует пути апоптоза CD95 / Fas типа I и II, связанные с терминальной миелоидной дифференцировкой. Онкоген 21 : 1600–1610.

    CAS PubMed Google ученый

  • Амати Б, Земля H. (1994). Myc-Max-Mad: сеть факторов транскрипции, контролирующая развитие, дифференцировку и смерть клеточного цикла. Curr Opin Gene Dev 4 : 102–108.

    CAS Google ученый

  • Аменте С., Гаргано Б., Варроне Ф, Руджеро Л., Домингес-Сола Д., Ланиа Л. и др. .(2006). p14ARF напрямую взаимодействует с Myc через домен Myc BoxII. Cancer Biol Ther 5 : 287–291.

    CAS PubMed Google ученый

  • Amundson SA, Zhan Q, Penn LZ, Fornace Jr AJ. (1998). Myc подавляет индукцию генов остановки роста gadd34, gadd45 и gadd153 повреждающими ДНК агентами. Онкоген 17 : 2149–2154.

    CAS PubMed Google ученый

  • Annis MG, Soucie EL, Dlugosz PJ, Cruz-Aguado JA, Penn LZ, Leber B et al .(2005). Bax образует многослойные мономеры, которые олигомеризуются для повышения проницаемости мембран во время апоптоза. EMBOJ 24 : 2096–2103.

    CAS Google ученый

  • Askew DS, Ashmun RA, Simmons B, Cleveland JL. (1991). Конститутивная экспрессия c-Myc в IL-3-зависимой миелоидной клеточной линии подавляет остановку клеточного цикла и ускоряет апоптоз. Онкоген 6 : 1915–1922.

    CAS PubMed Google ученый

  • Askew DS, Ihle JN, Cleveland JL.(1993). Активация апоптоза, связанная с усиленной экспрессией Myc в миелоидных клетках-предшественниках, является доминирующей по отношению к подавлению апоптоза интерлейкином-3 или эритропоэтином. Кровь 82 : 2079–2087.

    CAS PubMed Google ученый

  • Баудино TA, Кливленд JL. (2001). Макс сеть сошла с ума. Mol Cell Biol 21 : 691–702.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Bouchard C, Lee S, Laulus-Hock V, Loddenkemper C, Eilers M, Schmitt CA.(2007). Факторы транскрипции FoxO подавляют управляемый Myc лимфомагенез посредством прямой активации Arf. Джин Дев 21 : 2775–2787.

    CAS PubMed Google ученый

  • Бруннер Т., Касибхатла С., Пинкоски М.Дж., Фрутчи К., Ю Нью-Джерси, Эчеверри Ф. и др. . (2000). Экспрессия лиганда Fas в активированных Т-клетках регулируется c-Myc. J Biol Chem 275 : 9767–9772.

    CAS PubMed Google ученый

  • Cao X, Bennett RL, May WS.(2008). c-Myc и каспаза-2 участвуют в активации Bax во время апоптоза, индуцированного цитотоксическим лекарственным средством. J Biol Chem 283 : 14490–14496.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Cavarretta IT, Neuwirt H, Untergasser G, Moser PL, Zaki MH, Steiner H et al . (2007). Антиапоптотический эффект аутокринной петли IL-6 в клеточной модели распространенного рака простаты опосредуется Mcl-1. Онкоген 26 : 2822–2832.

    CAS PubMed Google ученый

  • Corn PG, El-Deiry WS. (2007). Микроанализ экспрессии p-53-зависимого гена в ответ на гипоксию и повреждение ДНК. Cancer Biol Ther 6 : 1858–1866.

    CAS PubMed Google ученый

  • Conzen SD, Gottlob K, Kandel ES, Khanduri P, Wagner A, O’Leary M et al .(2000). Индукция развития клеточного цикла и ускорение апоптоза – две отдельные функции c-Myc: трансрепрессия коррелирует с ускорением апоптоза. Mol Cell Biol 20 : 6008–6018.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Д’Анджело С., Либерманн Д.А., Хоффман Б. (2008). Апоптотический ответ c-Myc не присущ блокированию терминальной миелоидной дифференцировки. J Cell Physiol 21 : 120–127.

    Google ученый

  • Данг С.В., О’Донелл К.А., Целлер К.И., Нгуен Т., Остхус Р.К., Ли Ф. (2006). Сеть генов-мишеней c-Myc. Semin Cancer Biol 16 : 253–264.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Данг CV, О’Доннелл К.А., Юоппери Т. (2005). Великий Myc ускользает при онкогенезе. Раковые клетки 8 : 177–178.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Дансен Т. Б., Уитфилд Дж., Росткер Ф, Браун-Свигарт Л., Эван Дж. (2006). Специфическая потребность в Bax, а не в Bak, при Myc-индуцированном апоптозе и подавлении опухоли in vivo . J Biol Chem 281 : 10890–10895.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Эгле А., Харрис А.В., Булье П., Кори С.(2004). Bim является супрессором Myc-индуцированного В-клеточного лейкоза мышей. Proc Natl Acad Sci USA 101 : 6164–6169.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Eischen CM, Packham G, Nip J, Fee BE, Hiebert SW, Zambetti GP et al . (2001b). Bcl-2 представляет собой мишень апоптоза, подавляемую как c-Myc, так и E2F-1. Онкоген 20 : 6983–6993.

    CAS PubMed Google ученый

  • Eischen CM, Weber JD, Roussel MF, Sherr CJ, Cleveland JL.(1999). Нарушение пути опухолевого супрессора ARF-Mdm2-p53 при Myc-индуцированном лимфомагенезе. Genes Dev 13 : 2658–2669.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Eischen CM, Woo D, Roussel MF, Cleveland JL. (2001a). Апоптоз, запускаемый Myc-индуцированным подавлением Bcl-X (L) или Bcl-2, обходится во время лимфомагенеза. Mol Cell Biol 21 : 5063–5070.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Эйзенман РН.(2000). Сеть max: скоординированная транскрипционная регуляция роста и пролиферации клеток. Харви Лект 96 : 1–32.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • Эван Г.И., Литтлвуд, ТД. (1993). Роль c-Myc в росте клеток. Curr Opin Genet Dev 3 : 44–49.

    CAS PubMed Google ученый

  • Эван Г.И., Уилли А.Х., Гилберт С.С., Литтлвуд Т.Д., Лэнд Х., Брукс М. и др. .(1992). Индукция апоптоза фибробластов белком c-Myc. Ячейка 69 : 119–128.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Фельшер Д.В., Епископ Дж. М.. (1999). Временное превышение активности Myc может вызывать геномную нестабильность и туморогенез. Proc Natl Acad Sci USA 96 : 3940–3944.

    CAS PubMed Google ученый

  • Festjens N, Vanden Berghe T, Cornelis S, Vandenabeele P.(2007). RIP1, киназа на перекрестке решения клетки жить или умереть. Разница в гибели клеток 14 : 400–410.

    CAS PubMed Google ученый

  • Francois S, El Benna J, Dang PM, Pedruzzi E, Gougerot-Pocidalo MA, Elbim C. (2005). Ингибирование апоптоза нейтрофилов агонистами TLR в цельной крови: участие сигнальных путей фосфоинозитид-3-киназа / Akt и NF-kappaB, что приводит к увеличению уровней Mcl-1, A1 и фосфорилированного Bad. J Immunol 174 : 3633–3642.

    CAS PubMed Google ученый

  • Гартель А.Л., Щорс К. (2003). Механизмы c-Myc-опосредованной репрессии транскрипции генов остановки роста. Exp Cell Res 283 : 17–21.

    CAS PubMed Google ученый

  • Guillouf C, Grana X, Selvakumaran M, Giordano A, Hoffman B, Liebermann DA.(1995). Анализ генетических программ 53-опосредованной остановки роста G1 и апоптоза: блокирование p53-индуцированного апоптоза демаскирует задержку роста G1. Кровь 85 : 2691–2698.

    CAS PubMed Google ученый

  • Hemann MT, Bric A, Teruya-Feldstein J, Herbst A, Nilsson JA, Cordon-Cardo C и др. . (2005). Уклонение от сети наблюдения за опухолью p53 мутантами Myc, полученными из опухоли. Природа 436 : 807–811.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Хенрикссон М., Люшер Б. (1996). Белки сети Myc: важные регуляторы роста и дифференцировки клеток. Adv Cancer Res 68 : 109–182.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Hermeking H, Eick D. (1994). Опосредование c-Myc апоптоза с помощью p53. Наука 265 : 2091–2093.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Хо Дж.С., Ма З., Мао Д.Й., Бенчимол С. (2005). p53-зависимая репрессия транскрипции c-Myc необходима для остановки клеточного цикла G1. Mol Cell Biol 25 : 7423–7431.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Хоффман Б., Анамулла А., Шафаренко М., Либерманн Д.А.(2002). Протоонкоген c-Myc в развитии кроветворения и лейкемогенезе. Онкоген 21 : 3414–3421.

    CAS PubMed Google ученый

  • Хоффман Б., Либерман Д.А. (1998). Протоокоген c-Myc и апоптоз. Онкоген 17 : 3351–3357.

    PubMed Google ученый

  • Hsu B, Marin MC, el-Naggar AK, Stephens LC, Brisbay S, McDonnell TJ.(1995). Доказательства того, что апоптоз, опосредованный c-Myc, не требует р53 дикого типа во время лимфомагенеза. Онкоген 11 : 175–179.

    CAS PubMed Google ученый

  • Hueber AO, Zornig M, Lyon D, Suda T, Nagata S, Evan GI. (1997). Потребность в пути рецептор-лиганд CD95 при апоптозе, индуцированном c-Myc. Наука 278 : 1246–1247.

    Google ученый

  • Хурлин П.Дж., Хуанг Дж.(2006). Сеть факторов транскрипции, взаимодействующих с MAX. Semin Cancer Biol 16 : 265–274.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Iaccarino I, Hancock D, Evan G, Downward J. (2003). c-Myc индуцирует высвобождение цитохрома c в фибробластах Rat1 за счет увеличения проницаемости внешней митохондриальной мембраны зависимым от Bid образом. Cell Death Differ 10 : 599–608.

    CAS PubMed Google ученый

  • Цзян X, Цанг YH, Yu Q. (2007). Сверхэкспрессия c-Myc сенсибилизирует Bim-опосредованную активацию Bax для апоптоза, индуцированного ингибитором гистондеацетилазы субероиланилид гидроксамовой кислотой (SAHA), посредством регуляции экспрессии Bcl-2 / Bcl-xL. Int J Biochem Cell Biol 39 : 1016–1025.

    CAS PubMed Google ученый

  • Джуин П., Хант А., Литтлвуд Т., Гриффитс Б., Свигарт Л. Б., Корсмейер С. и др. .(2002). c-Myc функционально взаимодействует с Bax, вызывая апоптоз. Moll Cell Biol 22 : 6158–6169.

    CAS Google ученый

  • Kasibhatla S, Beere HM, Brunner T, Echeverri F, Green DR. (2000). «Неканонический» ДНК-связывающий элемент опосредует ответ промотора Fas-лиганда на c-Myc. Curr Biol 10 : 1205–1208.

    CAS PubMed Google ученый

  • Kelly PN, Puthalakath H, Adams JM, Strsasser A.(2007). Эндогенный bcl-2 не требуется для развития В-клеточной лимфомы, индуцированной Emu-Myc. Кровь 109 : 4907–4913.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Клефстром Дж., Ариги Э., Литтлвуд Т., Яаттела М., Саксела Э., Эван Г.И. и др. . (1997). Индукция TNF-чувствительного клеточного фенотипа c-Myc включает p53 и нарушение активации NF-kappaB. EMBOJ 16 : 7382–7392.

    CAS Google ученый

  • Knoepfler PS. (2007). Myc становится глобальным: новые уловки для старого онкогена. Cancer Res 67 : 5061–5063.

    CAS PubMed Google ученый

  • Kobayashi S, Werneburg NW, Bronk SF, Kaufmann SH, Gores GJ. (2005). Интерлейкин-6 способствует усилению регуляции Mcl-1 и устойчивости к TRAIL через Akt-сигнальный путь в клетках холангиокарциномы. Гастроэнтерология 128 : 2054–2065.

    CAS PubMed Google ученый

  • Kreuz S, Siegmund D, Rumpf JJ, Samel D, Leverkus M, Janssen O. (2004). Активация NFkappaB с помощью Fas опосредуется FADD, каспазой-8 и RIP и ингибируется с помощью FLIP. J Cell Biol 166 : 369–380.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Лахани С.А., Масуд А., Куида К., Портер-младший Г.А., Бут С.Дж., Мехал В.З. и др. .(2006). Каспазы 3 и 7: ключевые медиаторы митохондриальных событий апоптоза. Наука 311 : 847–851.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Либерманн Д.А., Хоффман Б. (2002). Гены миелоидной дифференцировки (MyD) / остановки роста ДНК (GADD) в подавлении опухоли, иммунитете и воспалении. Лейкемия 16 : 527–541.

    CAS PubMed Google ученый

  • Lindemans CA, Coffer PJ, Schellens IM, de Graaff PM, Kimpen JL, Koenderman L.(2006). Респираторно-синцитиальный вирус подавляет апоптоз гранулоцитов посредством фосфатидилинозитол-3-киназы и NF-каппаB-зависимого механизма. J Immunol 176 : 5529–5537.

    CAS PubMed Google ученый

  • Люшер Б., Ларссон LG. (2007). Мир согласно Myc. Отчеты EMBO 8 : 1110–1114.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • Люшер Б.(2001). Функция и регуляция факторов транскрипции сети Myc / Max / Mad. Джин 277 : 1014.

    Google ученый

  • Maclean KH, Keller UB, Rodriguez-Galindo C, Nilsson JA, Cleveland JL. (2003). c-Myc усиливает апоптоз, вызванный гамма-облучением, подавляя Bcl-XL. Mol Cell Biol 23 : 7256–7270.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Мэн Ф, Лю Л., Чин ПК, Д’Мелло СР.(2002). Akt является нижестоящей мишенью NF-каппа B. J Biol Chem 277 : 29674–29680.

    CAS PubMed Google ученый

  • Мейер Н., Ким С.С., Пенн Л.З. (2006). Оскаровская роль Myc в апоптозе. Semin Cancer Biol 16 : 275–287.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Мейлан Э., Чопп Дж.(2005). Киназы RIP: важнейшие интеграторы клеточного стресса. Trends Biochem Sci 30 : 151–159.

    CAS PubMed Google ученый

  • Митчелл К.О., Риччи М.С., Мияшита Т., Дикер Д.Т., Джин З., Рид Дж. С. и др. . (2000). Bax является мишенью для транскрипции и медиатором апоптоза, индуцированного c-Myc. Cancer Res 60 : 6318–6325.

    CAS PubMed Google ученый

  • Ниеминен А.И., Партанен Ю.И., Яу А., Клефстрем Дж.(2007b). Примированные c-Myc митохондрии определяют чувствительность клеток к TRAIL-индуцированному апоптозу. EMBO J 26 : 1055–1067.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Ниеминен А.И., Партанен Ю.И., Клефстром Дж. (2007a). C-Myc прокладывает себе путь смерти. Cell Cycle 6 : 2464–2472.

    CAS PubMed Google ученый

  • Никифоров М.А., Риблетт М., Тан У.Х., Гратчук В., Чжуанг Д., Фернандес У. и др. .(2007). Селективная регуляция NOXA к опухолевым клеткам с помощью c-Myc в ответ на ингибирование протеасом. Proc Natl Acad Sci USA 104 : 19488–19493.

    CAS PubMed Google ученый

  • Нильссон Дж. А., Кливленд Дж. Л.. (2003). Пути Myc, провоцирующие самоубийство клеток и рак. Онкоген 22 : 9007–9021.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Oster SK, Ho CS, Soucie EL, Penn LZ.(2002). Онкоген Myc: невероятно сложный. Adv Cancer Res 84 : 81–154.

    CAS PubMed Google ученый

  • Остер С.К., Мао Д.Й., Кеннеди Дж., Пенн Л.З. (2003). Функциональный анализ N-концевого домена онкобелка Myc. Онкоген 22 : 1998–2010.

    CAS PubMed Google ученый

  • Пател Дж. Х., МакМахон С. Б..(2006). Нацеливание на Miz-1 необходимо для Myc-опосредованного апоптоза. J Biol Chem 281 : 3283–3289.

    CAS PubMed Google ученый

  • Пател Дж. Х., МакМахон С. Б.. (2007). BCL2 является нижестоящим эффектором MIZ-1, необходимым для блокирования апоптоза, индуцированного c-Myc. J Biol Chem 282 : 5–13.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Пауклин С., Кристюхан А, Маймец Т., Якс В.(2005). ART и ATM / ATR взаимодействуют при p53-опосредованном апоптозе при онкогенном стрессе. Biochem Biophys Res Commun 334 : 386–394.

    CAS PubMed Google ученый

  • Pusapati RV, Rounbehler RJ, Hong S, Powers JT, Yan M, Kiguchi K et al . (2006). ATM способствует апоптозу и подавляет онкогенез в ответ на Myc. Proc Natl Acad Sci USA 103 : 1446–1451.

    CAS PubMed Google ученый

  • Ricci MS, Jin Z, Dews M, Yu D, Thomas-Tikhonenko A, Dicker DT et al .(2004). Прямая репрессия экспрессии FLIP c-Myc является основным фактором, определяющим чувствительность TRAIL. Mol Cell Biol 24 : 8541–8555.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Ricci MS, Kim SH, Ogi K, Plastaras JP, Ling J, Wang W et al . (2007). Снижение TRAIL-индуцированных Mcl-1 и cIAP2 с-Myc или сорафенибом сенсибилизирует устойчивые человеческие раковые клетки к TRAIL-индуцированной гибели. Раковые клетки 12 : 66–80.

    CAS PubMed Google ученый

  • Роттман С., Люшер Б. (2006). Безумная сторона сети max: противодействие функции myc и многое другое. Curr Top Microbiol Immunol 302 : 63–122.

    Google ученый

  • Сакамуро Д., Эвинер В., Эллиотт К.Дж., Шоу Л., Уайт Е., Прендергаст Г.К.(1995). c-Myc индуцирует апоптоз в эпителиальных клетках как по р53-зависимым, так и по р53-независимым механизмам. Онкоген 11 : 2411–2418.

    CAS PubMed Google ученый

  • Сарджент Л.М., Сандерсон Н.Д., Торгейрссон СС. (1996). Плоидность и кариотипические изменения, связанные с ранними событиями в развитии гепатоканцерогенеза у трансгенных мышей, несущих трансгены c-Myc и трансформирующего фактора роста альфа. Cancer Res 56 : 2137–2142.

    CAS PubMed Google ученый

  • Саркер Д., Фишер ПБ. (2006). Регуляция функции Myc с помощью ARF: контрольная точка для Myc-индуцированного онкогенеза. Cancer Biol Ther 5 : 693–695.

    Google ученый

  • Schmitt CA, McCurrach ME, De Stanchina E, Wallace-Brodeur RR, Lowe SW. (1999).Мутации INK4a / ARF ускоряют лимфомагенез и повышают химиорезистентность, отключая p53. Genes Dev 13 : 2670–2677.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Schulze-Bergkamen H, Brenner D, Krueger A, Suess D, Fas SC, Frey CR et al . (2004). Фактор роста гепатоцитов индуцирует Mcl-1 в первичных гепатоцитах человека и ингибирует опосредованный CD95 апоптоз через Akt. Гепатология 39 : 645–654.

    CAS PubMed Google ученый

  • Seoane J, Le HV, Massague J. (2002). Подавление Myc ингибитора Cdk p21 (Cip1) влияет на результат ответа p53 на повреждение ДНК. Природа 419 : 729–734.

    CAS PubMed Google ученый

  • Ши Ю., Глинн Дж. М., Гильберт В. Дж., Коттер Т. Г., Биссоннетт Р. П., Грин DR. (1992). Роль c-Myc в индуцированной активацией апоптотической гибели клеток в Т-клеточных гибридомах. Наука 257 : 212–214.

    CAS PubMed Google ученый

  • Спенсер CA, Groudine M. (1991). Контроль регуляции c-Myc в нормальных и неопластических клетках. Adv Cancer Res 56 : 1–48.

    CAS PubMed Google ученый

  • Вафа О., Уэйд М., Керн С., Бич М., Пандита Т.К., Хэмптон Г.М. и др. .(2002). c-Myc может вызывать повреждение ДНК, увеличивать количество активных форм кислорода и ослаблять функцию p53: механизм генетической нестабильности, вызванной онкогенами. Mol Cell 9 : 1031–1044.

    CAS PubMed Google ученый

  • Вайрапанди М., Баллиет АГ, Форнас А, Хоффман Б., Либерманн Д.А. (1996). Ген первичного ответа дифференцировки MyD118, родственный Gadd45, кодирует ядерный белок, который взаимодействует с PCNA и p21. Онкоген 12 : 2579–2594.

    CAS PubMed Google ученый

  • Веселый Д.Л., Хоффман Б., Либерманн Д.А. (2007). Передача сигналов фосфатидилинозитол-3-киназы / Akt опосредует защиту интерлейкина-6 от апоптоза, индуцированного р53, в миелоидных лейкозных клетках M1. Онкоген 26 : 3041–3050.

    CAS PubMed Google ученый

  • Vousden KH.(2002). Переход от жизни к смерти: связь Мизинга между Myc и p53. Раковые клетки 2 : 351–352.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Wagner AJ, Kokontis JM, Hay N. (1994). Myc-опосредованный апоптоз требует p53 дикого типа независимо от остановки клеточного цикла и способности p53 индуцировать p21waf1 / cip1. Genes Dev 8 : 2817–2830.

    CAS PubMed Google ученый

  • Ван И, Энгельс И.Х., Колено Д.А., Насофф М., Деверо КЛ, Квон К.С.(2004). Синтетическое летальное нацеливание Myc путем активации пути рецептора смерти DR5. Раковые клетки 5 : 501–512.

    CAS PubMed Google ученый

  • Wu S, Cetinkaya C, Munoz-Alonso MJ, von der Lehr N, Bahram F., Beuger V et al . (2003). Myc подавляет индуцированную дифференцировкой экспрессию p21CIP1 посредством Miz-1-зависимого взаимодействия с коровым промотором p21. Онкоген 22 : 351–360.

    CAS PubMed Google ученый

  • Zindy F, Eischen CM, Randle DH, Kamijo T, Cleveland JL, Sherr CJ et al . (1998). Передача сигналов Myc через опухолевый супрессор ARF регулирует р53-зависимый апоптоз и иммортализацию. Genes Dev 12 : 2424–2433.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • % PDF-1.4 % 44 0 объект > эндобдж 43 0 объект > поток StampPDF Batch 2.7 для Solaris – SPDF 10452006-11-10T13: 03: 26Z2021-10-10T18: 28: 57-07: 002021-10-10T18: 28: 57-07: 00XPPapplication / pdf

  • uuid: a437bac5-1dd1-11b2-0a00-1009276d7200uuid: a437bac9-1dd1-11b2-0a00-b80000000000
  • dc: создатель
  • dc: название
  • dc: описание
  • конечный поток эндобдж 41 0 объект > эндобдж 39 0 объект > эндобдж 45 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Rotate 0 / TrimBox [9 9 603 792] / Type / Page >> эндобдж 1 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Rotate 0 / TrimBox [9 9 603 792] / Type / Page >> эндобдж 7 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Rotate 0 / TrimBox [9 9 603 792] / Type / Page >> эндобдж 14 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Rotate 0 / TrimBox [9 9 603 792] / Type / Page >> эндобдж 20 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Rotate 0 / TrimBox [9 9 603 792] / Type / Page >> эндобдж 26 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Rotate 0 / TrimBox [9 9 603 792] / Type / Page >> эндобдж 107 0 объект > поток 0 0 0 0.2 к / GS0 гс 573,676 365,384 38,324 -66 рэ ж BT 0 0 0 1 к / T1_0 1 Тс -0,01489 Тс 9 0 0 9 51,6761 734,8835 Тм [(ограничено) -196,1 (ПЭТ) -196,1 (обнаружение) -196,1 (сенситив) -39,8 (оно) -30 (у,) – 196,1 (оно) -196,1 (есть) -196,1 (не) -196,1 (неожиданно) -196,1 (в) 19,8 (в) -196,1 (в месте) 19,8 (в) -196,1 (в)] TJ 0 -1,1199 TD [(не) -342,9 (найдено) -342,8 (по) -342,8 (ChIP-PET.) – 342,9 (The) -342,8 (осталось) -30 (i) -0,1 (нг) -342,8 (несоответствие) -30 ( y) -342,8 (c) -30 (ould) -342,8 (re) 19,8 (sult)] TJ Т * [(f) -30 (rom) -567,9 (the) -567.9 (пр.) -30 (перимент) -30 (ал) -567,9 (шум) -567,9 (ассоциированный) -567,9 (ш) -39,8 (i-й) -567,9 (чип) -567,9 (исследование) 19,8 (с) -567,9 (или)] TJ Т * [(dif) -30 (ference) 19,8 (s) -361,5 (i) -0,1 (n) -361,5 (ячейка) -361,5 (t) -30 (ype) 19,8 (s) -361,5 (или) -361,5 ( специфический) -361,5 (клетка) -361,5 (культура) -361,5 (в) -30 (усл.) – 361,5 (А) -30 (л) -0,1 (тер -)] TJ Т * [(исходно,) – 196,7 (the) -196,7 (l) -0,1 (arge) -196,7 (diff) -30 (f) -0,1 (erence) 19,8 (s) -196,7 (обнаружено) -196,7 (in) -) – 196,7 (с) 19,8 (с) -196,7 (с) -0,1 (с) 19,8 (с) -196.7 (c) -30 (ould) -196,7 (be) -196,7 (должным образом)] TJ 0 -1,1187 ТД [(to) -378,8 (the) -378,8 (f) -0,1 (act) -378,8 (that) -378,8 (Myc) -378,8 (привязка) -378,8 (are) -378,8 (c) -30 (комплекс) – 378,8 (а) -378,8 (динамич.) – 378,8 (потому что)] TJ Т * [(the) 19,8 (se) -238,4 (исследование) 19,8 (s) -238,4 (c) -30 (ould) -238,4 (be) -238,4 (только) -238,4 (снимки) -238,4 (из) -238,4 ( связывание) -238,4 (события) -238,4 (обнаружено) -238,4 (по)] TJ Т * [(дифф) -30 (ферент) -183,8 (методы,) – 183,8 (в) -183,8 (действительный) -183,8 (в) -30 (руда) -183,8 (г) -19,9 (г) -0,1 (уп) -183.8 (из) -183,8 (Myc) -183,8 (t) -30 (argets) -183,8 (будет) -183,8 (выйти)] TJ Т * [(только) -429,7 (когда) -429,7 (мы) -429,7 (есть) -429,7 (в состоянии) -429,7 (t) -0,1 (о) -429,6 (определить) -429,7 (дополнительно) -429,7 (весь геном) ) -429,7 (Myc)] TJ Т * [(прямой) -194,5 (транскриптом) 19,8 (s.) – 194,5 (Neverthele) 19,8 (ss,) – 194,5 (15) -194,5 (c) -30 (ommon) -194,5 (t) -30 (argets) – 194,5 (были) -194,5 (найдено)] TJ Т * [(это) -180,9 (участие) -180,9 (t) -0,1 (транскрипция) -180,9 (регулирование,) – 180,9 (ДНК) -180,9 (репликация) -180,9 (и) -180.9 (ячейка)] TJ Т * [(сигнализация) -317.9 (\ (см.) -317.9 (поддержка) -317.9 (i) -0.1 (nfor) -30 (mation \).)] TJ / T1_1 1 Тс 0 Tc 8 0 0 8 51.6761 604.0199 Tm [(Выводы) -549,7 (и) -549,7 (Будущее) -549,7 (Направления.)] TJ / T1_0 1 Тс 0,005 Тс 9 0 0 9 186,1852 604,0199 Тм [(A) -30 (хотя) -488,7 (роман) -488,7 (идеи) -488,7 (ар)] TJ -14,9455 -1,1187 тд [(подобрано) -358.9 (f) -30 (rom) -358.9 (this) -358.9 (study) -358.9 (and) -358.9 (много) -358.9 (que) 19.9 (stions) -358.9 (ответил,) – 358.9 (несколько)] TJ Т * [(наблюдатель) -60 (vations) -400.3 (имеют) -400,3 (сгенерировано) -400,3 (много) -400,3 (больше) -400,3 (que) 19,9 (доли) -400,3 (чем) -400,3 (те)] TJ Т * [(ответил.) – 188,5 (Для) -188,5 (пример) – 188,5 (хотя) -188,5 (это) -188,5 (есть) -188,5 (легко) -188,5 (c) -30 (разложить) -188,5 (что ) -188,5 (только)] TJ Т * [(le) 19,9 (ss) -354,5 (чем) -354,5 (половина) -354,5 (из) -354,5 (the) -354,5 (много) -354,5 (Myc-re) 19,9 (спонсирующий) -354,5 (ген) 19,9 (s) -354,5 (ар) -354,5 (связанный) -354,5 (by)] TJ Т * [(Myc,) – 352,3 (оно) -352,3 (остается) -352,3 (до) -352,3 (быть) -352,3 (детерминировать) -30 (добыто) -352.3 (почему) -352,3 (только) -352,3 (а) -352,3 (малый) -352,3 (ж) -30 (рация) -352,3 (из)] TJ Т * [(Myc) -567 (связывание) -566.9 (ген) -566.9 (локусы) -567 (являются) -566.9 (ассоциированные) -566.9 (w) -39.8 (iith) -566.9 (ген) -567 (ex) – 30 (pre) 19.9 (ssion)] TJ Т * [(изменение) 19,9 (с) – 375,4 (потому что) -375,3 (это) -375,4 (есть) -375,3 (k) -30 (теперь известно) -375,3 (то) -375,4 (транскрипция) -375,4 (факторы) – 375,4 (ассо -)] ТДж Т * [(ciate) -247,5 (w) -39,8 (iith) -247,5 (ДНК) -247,5 (неспецифически) -247,5 (к) -247,5 (сканирование) -247,5 (для) -247,5 (специфично) -247.5 (связывание) -247,5 (сайт) 19,9 (с,)] TJ Т * [(it) -352.9 (st) -30 (ands) -352.9 (to) -352.9 (причина) -352.9 (that) -352.9 (a) -352.9 (снимок) -352.9 (of) -352.9 (Myc) – 352,9 (связывание) -352,9 (к) -352,9 (геномный)] TJ Т * [(ДНК) -188,8 (by) -188,8 (ChIP) -188,8 (c) -30 (ould) -188,8 (лунка) -188,8 (захват) -188,8 (Myc) -188,8 (in) -188,8 (the) – 188,8 (действие) -188,8 (из) -188,8 (беспорядочно)] TJ Т * [(связывание) -227.6 (нет) -30 (arget) -227.6 (сайт) 19.9 (s) -227.6 (as) -227.6 (it) -227.6 (c) -30 (ont) -30 (ains) -227.6 (а) -227,6 (неспецифический) -227.6 (ДНК) -227,6 (связывание)] TJ Т * [(домен) -331,8 (\ (38 \).) – 331,8 (Это) -331,8 (c) -30 (ould) -331,8 (колодец) -331,8 (ac) -30 (c) -30 (ount) – 331,8 (для) -331,8 (в) -331,8 (для больших) -331,8 (для цифр) -331,8 (из)] TJ Т * [(связывание) -532,5 (сайт) 19,9 (с) -532,5 (для) -532,5 (E2F1) -532,5 (и) -532,5 (Myc) -532,5 (то) -532,6 (ар) -532,5 (скважина) -532,6 (за пределами) -532,5 (ген)] TJ Т * [(регулятор) -60 (y) -415.1 (re) 19.9 (sponse) 19.9 (s) -415.1 (\ (14,) – 415.1 (34 \).) – 415.1 (далее) -30 (подробнее,) – 415.1 (потому что) -415.1 (Myc) -415.1 (can)] TJ Т * [(af) -30 (fect) -207.7 (не) -207,7 (только) -207,7 (транскрипция) -207,7 (ат) -207,7 (диф) -30 (ферент) -207,7 (уровни) -207,7 (а) -207,7 (также) -207,7 (а) – 207,7 (глобальный)] TJ Т * [(хроматин) -250,7 (стр) -30 (структура) -250,7 (\ (39 \),) – 250,7 (его) -250,7 (связывание) -250,7 (самостоятельно) -250,7 (май) -250,7 (не) – 250,7 (be) -250,7 (suf) -30 (ficient)] TJ Т * [(для) -255,4 (ген) -255,4 (ex) -30 (pre) 19,9 (ssion) -255,4 (и) -255,4 (возможно) -255,4 (его) -255,4 (роль) -255,4 (in) -255,4 (the) 19.9 (se) -255.4 (loci) -255.4 (is) -255.4 (to) -255.4 (create)] TJ Т * [(готов) -273.1 (транскрипция) -273,1 (c) -30 (комплекс) 19,9 (s) -273,1 (то) -273,1 (будет) -273,1 (будет) -273,1 (триггер) -273,1 (по) -273,1 (сигнал)] TJ Т * [(трансдукция) -357 (пути.) – 357,1 (наконец,) – 357 (потому что) -357 (оба) -357 (наш) -357 (ChIP) -357 (ex) -30 (пери -)] TJ Т * [(ments) -267,7 (и) -267,7 (ген) -267,7 (ex) -30 (pre) 19,9 (ssion) -267,7 (анализ) -267,7 (были) -267,7 (per) -49,9 (for) -30 (med) -267,7 (on) -267,7 (выборка) 19,9 (s)] TJ Т * [(т) -30 (акен) -309,4 (ж) -30 (ром) -309,4 (а) -309,4 (одиночный) -309,4 (время) -309.4 (точка,) – 309,4 (это) -309,4 (это) -309,4 (возможно) -309,4 (то) -309,4 (динамическое) -309,4 (ген)] TJ Т * [(ex) -30 (pre) 19.9 (ssion) -213.7 (change) 19.9 (s) -213.7 (c) -30 (onsequential) -213.7 (to) -213.7 (Myc) -213.7 (привязка) -213.7 ( май) -213,7 (есть) -213,7 (был)] TJ Т * [(пропущено.) – 342,5 (As) -342,5 (такие,) – 342,5 (мы) -342,5 (env) -39,8 (ision) -342,5 (that) -342,5 (the) -342,5 (use) -342,5 (of ) -342,5 (индивидуально) -342,5 (олиго -)] TJ Т * [(нуклеотид) -298 (мозаичный) -298 (массивы) -298 (c) -30 (перекрывающий) -298 (the) -298 (высокий) -298 (качественный) -30 (y) -298 (ChIP-PET) ) -298 (локусы)] TJ 29.1667 41.3889 Td [(будет) -275 (быть) -275 (a) -275 (хорошо) -275 (инструмент) -275 (до) -275 (следовать) -275 (динамический) -275 (изменить) 19,9 (с) -275 (дюйм) -275 (Myc) -275 (связывание)] TJ 0 -1,1111 ТД [(это) -192 (c) -30 (ould) -191.9 (затем) -191.9 (be) -191.9 (напрямую) -192 (c) -30 (в сравнении) -192 (w) -39,8 (iith) – 191.9 (ген) -191.9 (ex) -30 (pre) 19.9 (ssion) -191.9 (level)] TJ -0,01489 Тс 1 -1,1111 Тд [(Наш) -517.1 (глобальный) -517.1 (отображение) -517.1 (из) -517.1 (Myc) -517.1 (связывание) -517.1 (локусы) -517.1 (in) -517.1 (a) -517.1 (хорошо) – 517.1 (определено,)] TJ -1 -1.1111 тд [(экс) -30 (перимент) -30 (союзник) -179 (тракт) -30 (способный) -179 (система) -179 (имеет) -179 (уступил) -179 (не) -179 (только) – 179 (новый) -179 (прямой) -179 (Myc)] TJ Т * [(t) -30 (arget) -307,5 ​​(ген) 19,8 (s,) – 307,5 ​​(но) -307,5 ​​(it) -307,5 ​​(также) -307,5 ​​(пер) -30 (митс) -307,5 ​​(диск) – 30 (больше) -60 (у) -307,5 ​​(из) -307,5 ​​(роман) -307,5 ​​(транскрипция)] TJ Т * [(регулятор) -60 (y) -215.3 (схема) -60 (y) -215.3 (мотивы) -215.3 (as) -215.3 (хорошо) -215.3 (as) -215.3 (цис) -215.3 (регулятор) – 60 (у) -215,3 (модуль) 19,8 (с) -0,1 (.) – 215.3 (Будущее)] TJ Т * [(studie) 19,8 (s) -173 (исходящий) -173 (f) -30 (rom) -173 (наш) -173 (глобальный) -173 (сопоставление) -173 (из) -173 (Myc) -173 (связывание) -173 (сайт) 19,8 (s) -173 (w) -39,8 (ill)] TJ Т * [(prov) -39,8 (ide) -443,2 (дополнительно) -443,2 (идеи) -443,2 (в) -443,2 (как) -443,2 (тумороген) 19,8 (sis) -443,2 (is) -443,2 (вызвано) -443,2 (автор)] TJ Т * (не регулируется) Tj / T1_2 1 Тс 5,2415 0 тд (MYC) Tj / T1_0 1 Тс [-0,1 (,) – 317,9 (a) -317,9 (часто) -317,9 (обнаружено) -317,9 (in) -317,9 (человек) -317,9 (рак)] TJ / T1_1 1 Тс -0.01961 Тс -5,2415 -2 Тд [(Экспериментальная) -313,1 (Процедуры)] TJ 0 Тс 8 0 0 8 314,1761 624,8835 Тм (Подробности.) Tj / T1_0 1 Тс 0,005 Тс 9 0 0 9 344,4671 624,8835 Тм [(Det) -30 (больной) -368,4 (ex) -30 (periment) -30 (al) -368,4 (процедура) 19,9 (s) -368,4 (can) -368,4 (be) -368,4 (обнаружено) -368,4 (дюйм) -368,4 (в)] TJ -3,3657 -1,1111 тд [(опорный) -337,8 (информ.) -30 (мат.)] ТДж / T1_1 1 Тс 0 Тс 8 0 0 8 314,1761 594,8835 Тм [(Клетка) -286,9 (Культура) -286,9 (и) -286,9 (ChIP.)] TJ / T1_0 1 Тс 0,005 Тс 9 0 0 9 394,1969 594,8835 Тм [(P493-6) -255.1 (клетки) -255,1 (были) -255,1 (культивированы) – 255,1 (и) -255,1 (ChIP) -255,1 (были)] TJ -8,8912 -1,1111 тд [(как) -337,8 (предыдущая) -39,8 ()] TJ / T1_1 1 Тс 0 Тс 8 0 0 8 314,1761 564,8835 Тм [(ChIP-PET) -348,7 (Эксперимент.)] TJ / T1_0 1 Тс -0,01489 Тс 9 0 0 9 394,0106 564,8835 Тм [(By) -310 (используя) -310 (the) -310 (Myc) -310 (ChIP-enriched) -310 (DNA) -310 (f) -30 (rag -)] TJ -8,8705 -1,1111 тд [(ments,) – 485,2 (а) -485,2 (Myc) -485,2 (ChIP-PET) -485,2 (библиотека) -60 (y) -485,2 (было) -485.2 (c) -30 (onstr) -30 (ucted) -485.2 (as) -485.2 (prev) -39.8 (fully)] TJ Т * [(de) 19,8 (написано) -317,9 (\ (16 \).)] TJ / T1_1 1 Тс 0 Тс 8 0 0 8 314,1761 524,8835 Тм [(кПЦР) -292,3 (анализ)] TJ / T1_0 1 Тс -0,01489 Тс 9 0 0 9 359,7556 524,8835 Тм [(кПЦР) -259,8 (анализ) 19,8 (с) -259,8 (были) -259,8 (пер) -49,9 (для) -30 (сред.) -259,8 (по) -259,8 (с использованием) -259,8 (А) -60 (BI) -259,8 (PR) -60 (ISM)] TJ -5,0644 -1,1111 тд [(7900) -292,3 (последовательность) -292,3 (обнаружение) -292,3 (система) -292,3 (и) -292,3 (SYBR) -292,3 (зеленый) -292,3 (мастер) -292.4 (смесь) -292,3 (ас)] TJ Т * [(пред.) -39,8 () -470,1 () 19,8 (начертано) -470,1 (\ (17).) – 470,1 (2 раза) -470,1 (из) -470,1 (обогащение) -470,1 (было) -470.1 (использованный) -470 (as)] TJ Т * [(cutof) -30 (f.) – 317.9 (Primer) -317.9 (последовательность) 19.8 (s) -317.9 (are) -317.9 (in) -317.9 (поддержка) -317.9 (infor) -30 (mation.) ] TJ / T1_1 1 Тс 0 Тс 8 0 0 8 314,1761 474,8835 Тм [(Ген) -514,6 (экспрессия) -514,5 (профилирование) -514,5 (анализ) -514,6 (использование) -514,5 (микрочип.)] TJ / T1_0 1 Тс -0,01489 Тс 9 0 0 9 516,8563 474,8835 Тм [(Tot) -30 (al) -457.4 (РНК)] TJ -22,52 -1,1111 тд [(изолированный) -289,5 (f) -30 (rom) -289,5 (P493) -289,5 (клетки) -289,5 (дюйм) -289,5 (the) -289,5 (pre) 19,8 (sence) -289,5 (of) -289,5 (отсутствие) -289,5 (из) -289,5 (тетрак) -30 (иклин)] TJ Т * [(были) -325,8 (использовались) -325,8 (до) -325,8 (зонд) -325,8 (A) -0,4 (f) -30 (f) -30 (y) -30 (метрикс) -325,8 (U133) – 325,8 (плюс) -325,8 (2,0) -325,8 (массив) -325,8 (следовать) -39,8 (вход) -325,8 (в)] TJ Т * [(производитель \ 222s) -317.9 (рек.) -30 (поправка) -317.9 (как) -317.9 (предыдущий) -39,8 (сильно) -317.9 (де) 19,8 (писанный) -317.9 (\ (25 \).)] Т.Дж. 0,005 Тс 8 0 0 8 314,1761 425,3835 Тм [(Мы) -264,5 (спасибо) -264,5 (B.) – 264,5 (Амати) -264,5 (для) -264,5 (предложение) 19,9 (разделы) -264,5 (и) -264,5 (предварительная публикация) -264,5 (информация) – 29,8 (мат.) – 264,5 (ср.)] ТДж 0 -1,125 TD [(подтверждение) -29,8 (новые знания) -248,9 (г-н) – 248,9 (H.) – 248,9 (Торо) -248,9 (и) -248,9 (в) -248,9 (геном) -248,9 (технолог) -39,7 (гг.) ) -248,9 (и) -248,9 (биологический) -39,7 (y)] TJ Т * [(Группа) -261,3 (в) -261,3 (в) -261,3 (Геном) -261,3 (Институт) -261,3 (из) -261,3 (Сингапур) -261,3 (для) -261.3 (техн.) -29,8 (ical) -261,3 (оп.) – 261,3 (это)] TJ Т * [(работа) -418,3 (было) -418,3 (поддержано) -418,3 (by) -418,3 (the) -418,3 (Agenc) -29,8 (y) -418,3 (for) -418,3 (Science,) – 418,3 (Technolog) -39,7 (у) -418,3 (и) -418,3 (Re -)] ТДж Т * [(поиск) -206,3 (\ (A * STA) -29,8 (R \)) – 206,3 (из) -206,3 (Сингапур;) – 206,3 (по стране) -206,3 (институт) 19,9 (с) -206,3 (из) -206,3 (Здоровье) -206,3 (ENCODE)] TJ Т * [(Грант) -509,6 (1R01HG003521-01;) – 509,6 (и) -509,5 (национальный) -509,6 (институт) 19,9 (с) -509,6 (из) -509,6 (здоровье) -509.6 (Гранты)] TJ Т * [(CA57341) -305 (и) -305 (CA51497.) – 305 (CVD) -305 (is) -305 (the) -305 (Johns) -305 (Hopk) -29,8 (ins) -305 (Семья) -305 (Profe) 19,9 (ssor)] TJ Т * [(in) -337.7 (Onc) -29.8 (olog) -39.7 (y) -337.7 (Re) 19.9 (search.)] TJ 7 0 0 7 55,392 337,7841 тм [(1.) – 423,7 (Адхик) -29,6 (ар) -59,6 (у) -337,6 (S,) – 337,6 (Эйлерс) -337,6 (М) -337,7 (\ (2005 \))] TJ / T1_2 1 Тс 14,0652 0 тд [(Nat) -337,6 (Rev) -337,6 (Mol) -337,6 (Cell) -337,6 (Biol)] TJ / T1_0 1 Тс 9,8402 0 тд [(6: 635 \ 226) -89,7 (645.)] TJ -23,9055 -1,2143 тд [(2.) -423,7 (Грандори) -313,3 (C,) – 313,3 (Каули) -313,3 (SM,) – 313,3 (Джейм) 19,9 (с) -313,3 (LP,) – 313,3 (Эйзенман) -313,3 (RN) -313,3 (\ (2000 \))] TJ / T1_2 1 Тс 26,7052 0 Тд [(Annu) -313,3 (Rev) -313,3 (Cell) -313,3 (Dev)] TJ -25,5217 -1,2143 тд (Биол) Tj / T1_0 1 Тс 2,0532 0 тд [(16: 653 \ 226) -89,7 (699.)] TJ -3,2366 -1,2143 тд [(3.) – 423,7 (Blackwood) -337,6 (EM,) – 337,6 (Eisenman) -337,6 (RN) -337,6 (\ (1991 \))] TJ / T1_2 1 Тс 18.1834 0 Тд (Наука) Tj / T1_0 1 Тс 3,4708 0 тд (251: 1211 \ 2261217.) Tj -21,6542 -1,2143 тд [(4.) – 423.7 (Claassen) -337,6 (GF,) – 337,6 (Hann) -337,6 (SR) -337,6 (\ (1999 \))] TJ / T1_2 1 Тс 14.926 0 Тд (Онкоген) Tj / T1_0 1 Тс 4,4777 0 тд (18: 2925 \ 2262933.) Tj -0,03979 Тс -19,4037 -1,2143 Тд [(5) -44,7 (.) – 468,4 (Амати) -496,8 (B,) – 496,8 (Ручьи) -496,8 (MW,) – 496,8 (Лев) -29,7 (y) -496,8 (N,) – 496,8 ( Littlewood) -496,8 (TD,) – 496,8 (Evan) -496,8 (GI,) – 496,8 (L) -29,7 (и) -496,8 (H) -496,8 (\ (1993 \))] TJ / T1_2 1 Тс 33,312 0 Тд (Ячейка) Tj / T1_0 1 Тс -32.1286 -1.2143 тд (72: 233 \ 226245.) Tj 0,0049 Тс -1,1834 -1,2143 Тд [(6.) -423,7 (Коул) -337,6 (MD,) – 337,6 (МакМахон) -337,6 (SB) -337,6 (\ (1999 \))] TJ / T1_2 1 Тс 15.4651 0 тд (Онкоген) Tj / T1_0 1 Тс 4,4777 0 тд [(18: 2916) -89,7 (\ 2262924.)] TJ -0,03979 Тс -19,9428 -1,2143 Тд [(7) -44,7 (.) – 468,4 (Целлер) -173,7 (KI,) – 173,7 (Джегга) -173,7 (AG,) – 173,7 (Ароноу) -173,7 (BJ,) – 173,7 (O \ 222Donnell) – 173,7 (KA,) – 173,7 (Dang) -173,7 (CV) -173,7 (\ (2003 \))] TJ / T1_2 1 Тс 27.054 0 Тд [(Геном) -173,7 (Биол)] TJ / T1_0 1 Тс 5,1908 0 тд (4: R69.) Tj 0,0049 Тс -32,2447 -1,2143 Тд [(8.) – 423,7 (Ватсон) -402.2 (JD,) – 402,2 (Остер) -402,2 (SK,) – 402,2 (Шаго) -402,2 (M,) – 402,2 (K) -29,6 (хосрав) -39,8 (i) -402,2 (F,) – 402,2 (Penn) -402,2 (LZ) -402,2 (\ (2002 \))] TJ / T1_2 1 Тс 29.4284 0 тд [(J) -402,2 (Biol) -402,2 (Chem)] TJ / T1_0 1 Тс -28,2449 -1,2143 тд (277: 36921 \ 22636930.) Tj -1,1834 -1,2143 тд [(9.) – 423,7 (Ремондин) -29,6 (i) -280,8 (D,) – 280,8 (O \ 222Connell) -280,8 (B,) – 280,8 (Интратор) -280,8 (N,) – 280,8 (Седив) -29,6 (y) -280,8 (JM,) – 280,8 (Neretti) -280,8 (N,) – 280,8 (Castellan) -29,6 (i) -280,8 (GC,)] TJ 1,1834 -1,2143 тд [(Купер) -337.6 (LN) -337,6 (\ (2005 \))] TJ / T1_2 1 Тс 8.4803 0 тд [(P) -29,6 (roc) -337,6 (Natl) -337,6 (Acad) -337,6 (Sci) -337,6 (США)] TJ / T1_0 1 Тс 10,8918 0 тд [(102: 6902 \ 226) -89,7 (6906.)] ТДж -21,0604 -1,2143 тд [(10.) – 423,6 (Менсен) -337,6 (A,) – 337,6 (Her) -29,6 (мэк) -29,6 (инг) -337,6 (H) -337,6 (\ (2002 \))] TJ / T1_2 1 Тс 16.7978 0 тд [(P) -29,6 (roc) -337,6 (Natl) -337,6 (Acad) -337,6 (Sci) -337,6 (США)] TJ / T1_0 1 Тс 10,8918 0 тд [(99: 6274) -89,7 (\ 226) -89,7 (6279.)] TJ -27,6896 -1,2143 тд [(11.) – 423,6 (Соломон) -337,6 (MJ,) – 337.6 (L) -29,6 (арсен) -337,6 (PL,) – 337,6 (Варшавский) -337,6 (A) -337,6 (\ (1988 \))] TJ / T1_2 1 Тс 22,5552 0 тд (Ячейка) Tj / T1_0 1 Тс 2.0002 0 тд (53: 937 \ 226947.) Tj -24,5554 -1,2143 тд [(12.) – 423,6 (Фернандес) -315,7 (PC,) – 315,7 (Франк) -315,7 (SR,) – 315,7 (Ван) -315,7 (L,) – 315,7 (Шредер) -315,7 (M,) – 315,7 (Лю) -315,7 (S,) – 315,7 (Грин) -315,7 (J,) – 315,7 (Кочито) -315,7 (A,)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(Амати) -337,6 (B) -337,6 (\ (2003 \))] TJ / T1_2 1 Тс 7.2035 0 Тд [(Genes) -337.6 (Dev)] TJ / T1_0 1 Тс 4.9134 0 Тд (17: 1115 \ 2261129.) Tj -13,8052 -1,2143 тд [(13.) – 423,6 (Li) -291 (Z,) – 291 (Ван) -291 (Calcar) -291 (S,) – 291 (Qu) -291 (C,) – 291 (Кавени) -291 (WK,) – 291 (Zhang) -291 (MQ,) – 291 (Ren) -291 (B) -291 (\ (2003 \))] TJ / T1_2 1 Тс 31.2935 0 Тд [(P) -29,6 (roc) -291 (Natl)] TJ -29,6052 -1,2143 тд [(Acad) -337,6 (Sci) -337,6 (США)] TJ / T1_0 1 Тс 6.4598 0 Тд [(100: 8164) -89,7 (\ 226) -89,7 (8169.)] TJ -0,03979 Тс -8,1481 -1,2143 Тд [(1) -44,7 (4) -44,7 (.) – 468,3 (Cawley) -279,3 (S,) – 279,3 (Bek) -29,7 (iranov) -279,3 (S,) – 279,3 (Ng) -279,3 (HH) ,) – 279,3 (Капранов) -279.3 (P,) – 279,3 (Sek) -29,7 (inger) -279,3 (EA,) – 279,3 (Kampa) -279,3 (D,) – 279,3 (Pic) -29,7 (c) -29,7 (olbon) -29,7 ( i) -279,3 (A,)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(Sementchenk) -29,7 (o) -293,1 (V,) – 293,1 (Cheng) -293,1 (J,) – 293,1 (Williams) -293,1 (AJ,)] TJ / T1_2 1 Тс 16.5613 0 тд [(et) -293,1 (al) -29,7 (.)] TJ / T1_0 1 Тс 2,1388 0 тд (\ (2004 \)) Tj / T1_2 1 Тс 2,8204 0 тд (Ячейка) Tj / T1_0 1 Тс 1.777 0 тд [(116: 499) -89,7 (\ 226509.)] TJ 0,0049 Тс -24,9858 -1,2143 Тд [(15.) – 423,6 (Мао) -364,4 (DY,) – 364,4 (Уотсон) -364,4 (JD,) – 364.4 (Ян) -364,4 (ПС,) – 364,4 (Барсы) -29,6 (те-Л) -29,6 (оведжой) -364,4 (Д,) – 364,4 (К) -29,6 (хосрав) -39,8 (и) -364,4 (F,) – 364,4 (Вонг) -364,4 (WW,)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(Фарнхэм) -337,6 (PJ,) – 337,6 (Хуанг) -337,6 (T) -59,6 (H,) – 337,6 (Penn) -337,6 (LZ) -337,6 (\ (2003 \))] TJ / T1_2 1 Тс 18,7067 0 Тд [(Cur) -39,7 (r) -337,6 (Biol)] TJ / T1_0 1 Тс 4.3591 0 Тд [(13: 882 \ 226) -89,7 (886.)] TJ -24,7541 -1,2143 тд [(16.) – 423,6 (Wei) -284,9 (CL,) – 284,9 (Wu) -284,9 (Q,) – 284,9 (Vega) -284,9 (VB,) – 284,9 (Chiu) -284,9 (KP,) – 284,9 (нг) -284.9 (P,) – 284,9 (Zhang) -284,9 (T,) – 284,9 (Shahab) -284,9 (A,) – 284,9 (Yong) -284,9 (HC,) – 284,9 (Fu)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(Y,) – 337,6 (Венг) -337,6 (Z,)] TJ / T1_2 1 Тс 5.545 0 тд [(et) -337,6 (al) -29,6 (.)] TJ / T1_0 1 Тс 2.4513 0 тд (\ (2006 \)) Tj / T1_2 1 Тс 3,1329 0 тд (Ячейка) Tj / T1_0 1 Тс 2.0002 0 тд (124: 207 \ 226219.) Tj -14,8178 -1,2143 тд [(17.) – 423,6 (L) -29,6 (oh) -296,7 (YH,) – 296,6 (Wu) -296,7 (Q,) – 296,6 (Chew) -296,7 (JL,) – 296,6 (Vega) -296,6 (VB,) – 296,6 (Чжан) -296,6 (W,) – 296,6 (Чен) -296,7 (X,) – 296,6 (Бурк) -296.6 (G,) – 296,7 (Джордж)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(J,) – 337,6 (Леонг) -337,6 (B,) – 337,6 (Лю) -337,6 (J,)] TJ / T1_2 1 Тс 8,2496 0 тд [(et) -337,6 (al) -29,6 (.)] TJ / T1_0 1 Тс 2.4513 0 тд (\ (2006 \)) Tj / T1_2 1 Тс 3,1329 0 тд [(Nat) -337,6 (Genet)] TJ / T1_0 1 Тс 4,7284 0 тд [(38: 431 \ 226) -89,7 (440.)] TJ -20,2505 -1,2143 тд [(18.) – 423,6 (Pajic) -262,6 (A,) – 262,6 (Spitk) -29,6 (ovsky) -262,6 (D,) – 262,6 (Christoph) -262,6 (B,) – 262,6 (Kempke) 19,9 ( s) -262,6 (B,) – 262,6 (Schuhmacher) -262,6 (M,) – 262,6 (St) -29,6 (aege) -262,6 (MS,)] TJ 1.6883 -1,2143 тд [(Brielmeier) -445,2 (M,) – 445,2 (Ellwart) -445,2 (J,) – 445,2 (Kohlhuber) -445,2 (F,) – 445,2 (Bornk) -29,6 (амм) -445,2 (GW,)] TJ / T1_2 1 Тс 25.7171 0 тд [(et) -445,2 (al) -29,6 (.)] TJ / T1_0 1 Тс 2.6664 0 тд (\ (2000 \)) Tj / T1_2 1 Тс 3,2405 0 тд [(Инт) -445,2 (Дж)] ТДж -31,624 -1,2143 тд (Рак) Tj / T1_0 1 Тс 3.3239 0 Тд (87: 787 \ 226793.) Tj -5,0122 -1,2143 тд [(19.) – 423,6 (Кузнецов) -423,7 (ВА) -423,7 (\ (2005 \)) – 423,7 (дюйм)] TJ / T1_2 1 Тс 13.0718 0 Тд [(ISAGE:) – 423,7 (Cur) -39,7 (аренда) -423,7 (Технологии) -423.7 (и) -423,7 (Приложения)] TJ / T1_0 1 Тс 0,4286 Тс 20,5437 0 Тд [(, e) 423,7 (d)] ТДж 0,0049 Тс -31,9272 -1,2143 Тд [(Ван) -337,6 (SM) -337,7 (\ (Horizon) -337,6 (BioScience,) – 337,6 (Nor) -29,6 (w) -39,8 (ich,) – 337,6 (UK \),) – 337,6 (стр. ) -337,6 (139) -89,7 (\ 226180.)] TJ -1,6883 -1,2143 тд [(20.) – 423,6 (Pave) 19,9 (si) -337,6 (G,) – 337,6 (Mauri) -337,6 (G,) – 337,6 (Pe) 19,9 (подошва) -337,6 (G) -337,6 (\ ( 2001 \))] TJ / T1_2 1 Тс 17.9818 0 тд [(Биоинфор) -29,6 (матикс)] TJ / T1_0 1 Тс 6.5156 0 тд [(17 \ (Suppl) -337,6 (1 \): S207 \ 226S214.)] TJ 13.0027 38.8571 Td [(21.) – 423,7 (Грэсли) -337,6 (PJ,) – 337,6 (Боннар) -337,6 (C,) – 337,6 (Амати) -337,6 (B) -337,6 (\ (2000 \))] TJ / T1_2 1 Тс 20.1121 0 Тд [(Нуклеиновая) -337,6 (Кислоты) -337,6 (Res)] TJ / T1_0 1 Тс 7.9752 0 тд [(28: 446) -89,7 (\ 226) -89,7 (453.)] TJ -28,0872 -1,2143 тд [(22.) – 423,7 (Тушер) -207,4 (VG,) – 207,4 (Тибширан) -29,6 (i) -207,4 (R,) – 207,4 (Чу) -207,4 (G) -207,4 (\ (2001 \) )] TJ / T1_2 1 Тс 18.9259 0 Td [(P) -29,6 (roc) -207,4 (Natl) -207,4 (Acad) -207,4 (Sci) -207,4 (США)] TJ / T1_0 1 Тс 10,2404 0 тд [(98: 5116) -89.7 (\ 2265121.)] Т.Дж. -29,1663 -1,2143 тд [(23.) – 423,7 (Mi) -276,8 (H,) – 276,8 (L) -29,6 (Азарева-Улицкий) -276,8 (B,) – 276,8 (L) -29,6 (oo) -276,8 (R,) -276,8 (Кеджаривал) -276,8 (A,) – 276,8 (Вандерг) -19,9 (винтовка) -29,6 (f) -276,8 (J,) – 276,8 (Rabk) -29,6 (дюйм) -276,8 (S,) – 276,7 (Guo)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(N,) – 201,7 (Mur) -29,6 (угануджан) -201,7 (A,) – 201,7 (Doremieux) -201,7 (O,) – 201,7 (Кэмпбелл) -201,7 (MJ,)] TJ / T1_2 1 Тс 21.1171 0 Тд [(et) -201,7 (al) -29,6 (.)] TJ / T1_0 1 Тс 2,1794 0 тд (\ (2005 \)) Tj / T1_2 1 Тс 2.997 0 тд [(Nucleic) -201.7 (кислоты) -201,7 (Res)] TJ / T1_0 1 Тс -26,2935 -1,2143 тд [(33: D284) -89,7 (\ 226D288.)] TJ -1,6883 -1,2143 тд [(24.) – 423,7 (He) -362,4 (L,) – 362,4 (Томсон) -362,4 (JM,) – 362,4 (Хеманн) -362,4 (MT,) – 362,4 (Эрнандо-Монж) -362,4 (E, ) -362,4 (Mu) -362,4 (D,) – 362,4 (Гудсон) -362,4 (S,)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(Полномочия) -425,3 (S,) – 425,3 (Кордон-Кардо) -425,3 (C,) – 425,3 (L) -29,6 (задолженность) -425,3 (SW,) – 425,3 (Хэннон) -425,3 (GJ,) -425,3 (Хаммонд) -425,3 (SM) -425,3 (\ (2005 \))] TJ / T1_2 1 Тс 0 -1,2143 ТД (Природа) Tj / T1_0 1 Тс 3.2019 0 Вт [(435: 828) -89,7 (\ 226) -89,7 (833.)] TJ -4,8902 -1,2143 тд [(25.) – 423,7 (O \ 222Donnell) -314,9 (KA,) – 314,9 (Wentzel) -314,9 (EA,) – 314,9 (Zeller) -314,9 (KI,) – 314,9 (Dang) -314,9 (CV, ) -314,9 (Менделл) -314,9 (JT) -314,9 (\ (2005 \))] TJ / T1_2 1 Тс 32,4822 0 тд (Природа) Tj / T1_0 1 Тс -30,7939 -1,2143 тд [(435: 839) -89,7 (\ 226) -89,7 (843.)] TJ -1,6883 -1,2143 тд [(26.) – 423,7 (Seoane) -218,7 (J,) – 218,7 (Pouponnot) -218,7 (C,) – 218,7 (St) -29,6 (аллергия) -218,7 (P,) – 218,7 (Schader) -218,7 (М,) – 218,7 (Эйлерс) -218,7 (М,) – 218.7 (Massague) -218,7 (J) -218,7 (\ (2001 \))] TJ / T1_2 1 Тс 33.8004 0 тд (Nat) Tj -32,1121 -1,2143 тд [(Cell) -337,6 (Biol)] TJ / T1_0 1 Тс 4,0533 0 Тд [(3: 400) -89,7 (\ 226) -89,7 (408.)] TJ -5,7417 -1,2143 тд [(27.) – 423,7 (Сеоан) -337,6 (Дж,) – 337,6 (Ле) -337,6 (HV,) – 337,6 (Массаг) -337,6 (Дж) -337,6 (\ (2002 \))] TJ / T1_2 1 Тс 18.4026 0 Тд (Природа) Tj / T1_0 1 Тс 3.2019 0 Вт [(419: 729) -89,7 (\ 226734.)] TJ -21,6045 -1,2143 тд [(28.) – 423,7 (МакМахон) -304,4 (SB,) – 304,4 (Ван) -304,4 (Буск) -29,6 (IRK) -304,4 (H) -59,6 (A,) – 304.4 (Dugan) -304,4 (KA,) – 304,4 (Copeland) -304,4 (TD,) – 304,4 (Cole) -304,4 (MD) -304,4 (\ (1998 \))] TJ / T1_2 1 Тс 1.6883 -1.2143 тд (Ячейка) Tj / T1_0 1 Тс 2.0002 0 тд (94: 363 \ 226374.) Tj -3,6885 -1,2143 тд [(29.) – 423,7 (Wingender) -361,6 (E,) – 361,6 (Chen) -361,6 (X,) – 361,6 (Hehl) -361,6 (R,) – 361,6 (Карас) -361,6 (H,) – 361,6 (Либих) -361,6 (I,) – 361,6 (Мат) -29,6 (ys) -361,6 (V,) – 361,6 (Мейнхард) -361,6 (T,)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(Pr) -29,6 (uss) -337,6 (M,) – 337,6 (Reuter) -337,6 (I,) – 337,6 (Schacherer) -337,6 (F) -337,6 (\ (2000 \))] TJ / T1_2 1 Тс 17.8464 0 тд [(Нуклеиновая) -337,6 (Кислоты) -337,6 (Res)] TJ / T1_0 1 Тс 7.9752 0 тд [(28: 316) -89,7 (\ 226319.)] TJ -27,5098 -1,2143 тд [(30.) – 423,7 (Sears) -337,6 (RC,) – 337,6 (Nev) -39,8 (ins) -337,6 (JR) -337,6 (\ (2002 \))] TJ / T1_2 1 Тс 14,4437 0 тд [(J) -337,6 (Biol) -337,6 (Chem)] TJ / T1_0 1 Тс 5,6199 0 тд (277: 11617 \ 22611620.) Tj -20,0636 -1,2143 тд [(31.) – 423,7 (Guc) -29,6 (cione) -416 (E,) – 416 (Martinato) -416 (F,) – 416 (Finoc) -29,6 (chiaro) -416 (G,) – 416 (Luzi) -416 (L,) – 416 (Tizzon) -29.6 (i) -416 (L,) – 416 (Dall \ 222) -416 (Olio) -416 (V,)] TJ 1.6883 -1,2143 тд [(Зардо) -337,6 (G,) – 337,6 (Ner) -59,6 (v) -39,8 (i) -337,6 (C,) – 337,6 (Бернар) -337,6 (L,) – 337,6 (Амати) -337,6 ( B) -337,7 (\ (2006 \))] TJ / T1_2 1 Тс 20.9352 0 тд [(Nat) -337,6 (Cell) -337,6 (Biol)] TJ / T1_0 1 Тс 5.9376 0 тд [(8: 764) -89,7 (\ 226770.)] TJ -28,5611 -1,2143 тд [(32.) – 423,7 (Hulf) -362 (T,) – 362 (Bellost) -29,6 (a) -362 (P,) – 362 (Furrer) -362 (M,) – 362 (Steiger) -362 (D,) – 362 (Svensson) -362 (D,) – 362 (Barbour) -362 (A,) – 362 (Галант) -362 (P)] TJ 1.6883 -1.2143 тд (\ (2005 \)) Tj / T1_2 1 Тс 3.1329 0 Тд [(Мол) -337,6 (клетка) -337,6 (биол)] ТДж / T1_0 1 Тс 6.0626 0 Тд (25: 3401 \ 2263410.) Tj -10,8839 -1,2143 тд [(33.) – 423,7 (Ориан) – 267,8 (A,) – 267,8 (фургон) – 267,8 (Стинсель) – 267,8 (B,) – 267,8 (Делроу) – 267,8 (Дж,) – 267,8 (Бассемейкер) – 267,8 (HJ,) – 267,8 (Li) – 267,8 (L,) – 267,8 (Sawado) – 267,8 (T,) – 267,8 (Williams)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(E,) – 337,6 (L) -29,6 (oo) -337,6 (LW,) – 337,6 (Cowley) -337,6 (SM,) – 337,6 (Yost) -337,6 (C,)] TJ / T1_2 1 Тс 14.9235 0 Td [(et) -337,6 (al) -29,6 (.)] TJ / T1_0 1 Тс 2.4513 0 тд (\ (2003 \)) Tj / T1_2 1 Тс 3.1329 0 Тд [(Genes) -337.6 (Dev)] TJ / T1_0 1 Тс 4.9134 0 Тд (17: 1101 \ 2261114.) Tj -0,03979 Тс -27,1094 -1,2143 Тд [(3) -44,7 (4) -44,7 (.) – 468,4 (Бьеда) -293,1 (М,) – 293,1 (Сюй) -293,1 (Х,) – 293,1 (Певица) -293,1 (М,) – 293,1 ( Зеленый) -293,1 (R,) – 293,1 (Фарнхэм) -293,1 (PJ) -293,1 (\ (2006 \))] TJ / T1_2 1 Тс 24.7002 0 тд [(Геном) -293,1 (Res)] TJ / T1_0 1 Тс 5.2422 0 Тд [(16: 595 \ 226) -89,7 (605.)] TJ 0,0049 Тс -29,9424 -1,2143 Тд [(35.) – 423,7 (Cheng) -217,1 (AS,) – 217,1 (Jin) -217,1 (VX,) – 217,1 (Fan) -217,1 (M,) – 217,1 (Smith) -217.1 (LT,) – 217,1 (Liyanarachchi) -217,1 (S,) – 217,1 (Yan) -217,1 (PS,) – 217,1 (Leu) -217,1 (YW,) – 217,1 (Chan)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(MW,) – 337,6 (Plass) -337,6 (C,) – 337,6 (Племянник) -337,6 (KP,)] TJ / T1_2 1 Тс 12,176 0 Тд [(et) -337,6 (al) -29,6 (.)] TJ / T1_0 1 Тс 2.4513 0 тд (\ (2006 \)) Tj / T1_2 1 Тс 3,1329 0 тд [(Мол.) -337,6 (Ячейка)] ТДж / T1_0 1 Тс 4.0095 0 Тд [(21: 393 \ 226) -89,7 (404.)] TJ -0,03979 Тс -23,4581 -1,2143 Тд [(3) -44,7 (6) -44,7 (.) – 468,4 (Джонстон) -192,8 (LA,) – 192,8 (Пробер) -192,8 (DA,) – 192,8 (Эдгар) -192,8 (BA,) – 192.8 (Эйзенман) -192,8 (RN,) – 192,8 (Галант) -192,8 (P) -192,8 (\ (1999 \))] TJ / T1_2 1 Тс 28.9484 0 тд (Ячейка) Tj / T1_0 1 Тс 1.6767 0 тд [(98: 779) -89,7 (\ 226790.)] TJ 0,0049 Тс -30,6251 -1,2143 Тд [(37.) – 423,7 (Грандори) -214,3 (C,) – 214,3 (Гомес-Роман) -214,3 (N,) – 214,3 (Фелтон-Эдк) -29,6 (инс) -214,3 (ZA,) – 214,3 ( Ngouenet) -214,3 (C,) – 214,3 (Galloway) -214,3 (DA,)] TJ 1.6883 -1.2143 тд [(Эйзенман) -337,6 (RN,) – 337,6 (Белый) -337,6 (RJ) -337,6 (\ (2005 \))] TJ / T1_2 1 Тс 14.4514 0 Тд [(Nat) -337,6 (Cell) -337,6 (Biol)] TJ / T1_0 1 Тс 5.9376 0 тд (7: 311 \ 226318.) Tj -22,0774 -1,2143 тд [(38.) – 423,7 (Dang) -185,9 (CV,) – 185,9 (фургон) -185,9 (Dam) -185,9 (H,) – 185,9 (Бакмайр) -185,9 (M,) – 185,9 (Lee) -185,9 (ВМ) -185,9 (\ (1989 \))] TJ / T1_2 1 Тс 24.1548 0 Тд [(Мол.) -185,9 (клетка) -185,8 (биол.)] ТДж / T1_0 1 Тс 5.6073 0 тд (9: 2477 \ 2262486.) Tj -29,762 -1,2143 тд [(39.) – 423,7 (K) -29,6 (noepf) -89,7 (ler) -189,5 (PS,) – 189,5 (Zhang) -189,5 (XY,) – 189,5 (Cheng) -189,5 (PF,) – 189,5) (Gaf) -29,6 (ken) -189,5 (PR,) – 189,5 (McMahon) -189,5 (SB,) – 189,5 (Eisenman) -189,5 (RN)] TJ 1.6883 -1,2143 тд (\ (2006 \)) Tj / T1_2 1 Тс 3,1329 0 тд [(EMBO) -337,6 (J)] TJ / T1_0 1 Тс 4.0577 0 Тд (25: 2723 \ 2262734.) Tj / T1_3 1 Тс 0 Tc 6.5 0 0 6.5 51.6761 39.8835 Tm (Целлер) Tj / T1_4 1 Тс 2.9182 0 тд [(et) -305,1 (al)] TJ / T1_3 1 Тс (.) Tj 45,8882 0 тд (PNAS) Tj / T1_5 1 Тс 9,75 0 0 6,5 391,1682 39,8835 тм (\ 001) Tj / T1_6 1 Тс 6,5 0 0 6,5 399,3328 39,8835 тм [(Ноябрь) -305,1 (21,) – 305,1 (2006)] TJ / T1_5 1 Тс 9,75 0 0 6,5 464,5768 39,8835 тм (\ 001) Tj / T1_3 1 Тс 6,5 0 0 6,5 472,7414 39,8835 тм [(т.) – 305.1 (103)] ТДж / T1_5 1 Тс 9,75 0 0 6,5 502,4026 39,8835 тм (\ 001) Tj / T1_3 1 Тс 6,5 0 0 6,5 510,5673 39,8835 тм [(кол.) – 305,1 (47)] ТДж / T1_5 1 Тс 9,75 0 0 6,5 535,5289 39,8835 тм (\ 001) Tj / T1_6 1 Тс 6,5 0 0 6,5 543,6934 39,8835 тм (17839) Tj / T1_1 1 Тс 0 6,5 -6,5 0585,1761 318,4801 тм (ГЕНЕТИКА) Tj ET q / GS1 GS 19 0 0815,5 9 9 см 1,2143 TL / Im0 Do Q BT 0 г / GS1 GS / T1_7 1 Тс 0 4-4 0 23 14 тм (Загружено гостем 10 октября 2021 г.) Tj ET конечный поток эндобдж 29 0 объект > поток

    05-1580 673.0,681

    % PDF-1.5 % 61 0 объект > эндобдж 49 0 объект > эндобдж 48 0 объект > поток Acrobat Distiller 4.05 для Windows2021-10-10T18: 29: 12-07: 002006-01-06T07: 41: 50Z3B2 Total Publishing 6.06b / W2021-10-10T18: 29: 12-07: 00uuid: 5c0b41f8-2a51-482b- bca3-196ed1c42292uuid: a44f4b18-1dd1-11b2-0a00-810018a5dcffapplication / pdf

  • 05-1580 673..681
  • конечный поток эндобдж 47 0 объект > эндобдж 63 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 1 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 5 0 obj > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 9 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 13 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 18 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 21 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB] / XObject >>> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 24 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 26 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Rotate 0 / Type / Page >> эндобдж 98 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 127 0 объект [133 0 R 134 0 R 135 0 R 136 0 R 137 0 R 138 0 R 139 0 R] эндобдж 128 0 объект > поток q 540.0594177 0 0 68.6011963 22.4702911 666.3988037 см / Im0 Do Q BT / T1_0 1 Тс 10 0 0 10 85,56992 585,99988 тм (2006; 66: 673-681.) Tj / T1_1 1 Тс -5.55699 0 Тд (Рак Res \ 240) Tj / T1_0 1 Тс 0 1 ТД (\ 240) Tj 0 1.00001 TD (Дункан Стернс, Аника Чаудри, Тай В. Абель и др.) Tj / T1_2 1 Тс 0 1 ТД (\ 240) Tj / T1_3 1 Тс 18 0 0 18 30 626 тм (Сверхэкспрессия c-Myc вызывает анаплазию в медуллобластоме) Tj ET 30 531 525 35 рэ 0 0 мес. S BT / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120,94 202 538,99997 тм (\ 240) Tj / T1_3 1 Тс -7,55696 1 тд (Обновленная версия) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 141 530.99994 Тм (\ 240) Tj / T1_0 1 Тс 22.06696 1 тд () Tj 0 0 1 рг -22.06696 0 тд (http://cancerres.aacrjournals.org/content/66/2/673)Tj 0 г 0 1.00001 TD (См. Самую последнюю версию этой статьи по адресу:) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 30 510,99997 тм (\ 240) Tj 0 1 ТД (\ 240) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 30 490,99997 тм (\ 240) Tj Т * (\ 240) Tj ET 30 421 525 70 рэ 0 0 мес. S BT / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120,94 202 458,99997 тм (\ 240) Tj / T1_3 1 Тс -6.00198 1 тд (Цитированные статьи) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 141450.99994 Тм (\ 240) Tj / T1_0 1 Тс 27.78994 1 Td () Tj 0 0 1 рг -27.78994 0 Тд (http://cancerres.aacrjournals.org/content/66/2/673.full#ref-list-1)Tj 0 г 0 1.00001 TD (Эта статья цитирует 48 статей, 18 из которых вы можете получить бесплатно по адресу:) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120.94202 428.99997 тм (\ 240) Tj / T1_3 1 Тс -6,33498 1 тд (Цитирование статей) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 141 420,99994 тм (\ 240) Tj / T1_0 1 Тс 29.17994 1 Td () Tj 0 0 1 рг -29.17994 0 Тд (http://cancerres.aacrjournals.org/content/66/2/673.full # related-urls) Tj 0 г Т * (Эта статья процитирована в 12 статьях, размещенных на HighWire. Откройте страницу a \ статьи по адресу:) Tj ET BT / T1_2 1 Тс 10 0 0 10 30 400,99997 тм (\ 240) Tj 0 1 ТД (\ 240) Tj ET 30 276 525 125 рэ 0 0 мес. S BT / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120.94202 368.99997 тм (\ 240) Tj / T1_3 1 Тс -5.66901 1 тд (Оповещения по электронной почте) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 10 0 0 10 295,49973 381 тм (относится к этой статье или журналу.) Tj 0 0 1 рг -15.44997 0 Тд (Зарегистрируйтесь, чтобы получать бесплатные уведомления по электронной почте) Tj ET BT 0 г / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120.94202 335,99994 тм (\ 240) Tj / T1_3 1 Тс -6.38997 1 тд (Подписки) Tj 0,556 1,00001 тд (Отпечатки и) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 10 0 0 10 141 338,99994 тм (\ 240) Tj 13.46497 1 тд (.) Tj 0 0 1 рг -6.85098 0 Тд ([email protected]) Tj 0 г -6.61399 0 Тд (Отделение) Tj 0 1.00001 TD (Чтобы заказать перепечатку статьи или подписаться на журнал, свяжитесь с нами \ t Публикации AACR) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 11 0 0 11 120.94202 313.99997 тм (\ 240) Tj / T1_3 1 Тс -5.66901 1 тд (Разрешения) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 10 0 0 10 141275.99985 тм (\ 240) Tj 0 1 ТД (Сайт Rightlink.) Tj 0 1.00001 TD (\ (CCC \)) Tj 0 1 ТД (Нажмите «Запросить разрешения», чтобы перейти на страницу защиты авторских прав \ Рэнс Центр) Tj 22.06696 1 тд (.) Tj 0 0 1 рг -22.06696 0 тд (http://cancerres.aacrjournals.org/content/66/2/673)Tj 0 г 0 1.00001 TD (Чтобы запросить разрешение на повторное использование всей или части этой статьи, используйте это li \ nk) Tj ET BT / T1_0 1 Тс 9 0 0 9 269.74257 1.99997 тм (Исследования) Tj -1,34302 1 тд (10 октября 2021 г. \ 251 2006 Американская ассоциация рака) Tj 0 0 1 рг -12.\ q

    Идентификация in silico регуляторов транскрипции, связанных с c-Myc | Исследование нуклеиновых кислот

    Аннотация

    Разработка мощных экспериментальных стратегий для функциональной геномики и сопутствующих вычислительных инструментов принесла большие успехи в разграничении транскрипционных сетей в организмах от дрожжей до человека. Регуляция транскрипции эукариотических генов в значительной степени комбинаторна. Здесь мы использовали подход in silico для идентификации факторов транскрипции (TF), которые образуют повторяющиеся регуляторные модули с c-Myc, белком, кодируемым онкогеном, который часто не регулируется при злокачественных новообразованиях человека.Недавнее исследование выявило в геномном масштабе гены человека, промоторы которых связаны c-Myc и его гетеродимерным партнером Максом в клетках лимфомы Беркитта. Используя вычислительные методы, мы идентифицировали девять TF, чьи сигнатуры сайтов связывания сильно представлены в этом промоторном наборе мишеней c-Myc, что указывает на возможные функциональные связи между этими TF и ​​c-Myc. Сайты связывания большинства этих TF также обогащены набором промоторов гомологов мыши, что свидетельствует о функциональной консервации. Среди обогащенных ТФ есть несколько регуляторов, которые, как известно, контролируют развитие клеточного цикла.Другой TF в этом наборе, EGR-1, быстро активируется многочисленными стрессовыми проблемами и играет центральную роль в ангиогенезе. Экспериментальные исследования подтвердили, что c-Myc и EGR-1 связываются вместе на нескольких промоторах-мишенях. Применяемый здесь подход является общим и демонстрирует, как вычислительный анализ экспериментов по функциональной геномике может идентифицировать новые модули в сложных сетях регуляции транскрипции.

    Поступило 22.07.2004 г .; Пересмотрено и принято 21 августа 2004 г.

    ВВЕДЕНИЕ

    После завершения секвенирования генома человека и геномов многих других организмов исследовательские усилия смещаются в сторону функциональной геномики, т.е.е. расшифровка того, как компоненты физиологических сетей взаимодействуют и регулируют друг друга в клеточных системах. Наиболее заметными достижениями на сегодняшний день являются разграничение сетей регуляции транскрипции, что стало возможным с появлением общегеномных экспериментальных методик, которые конкретно проливают свет на этот слой клеточных систем (1-4). Эти методы включают микроматрицы экспрессии генов и комбинированную стратегию иммунопреципитации хроматина (ChIP) и микроматрицы промоторов (также называемые «ChIP-on-chip»).Первый позволяет одновременно регистрировать уровни экспрессии тысяч генов (5), а второй позволяет идентифицировать в масштабе генома промоторов, которые связываются специфическими факторами транскрипции (TF) при определенных условиях, в одном экспериментальном анализе (6, 7). Эти новые методы генерируют огромные объемы биологических данных, использование которых во многом зависит от разработки соответствующих вычислительных инструментов.

    Подход ChIP-on-chip недавно был использован для картирования глобальных взаимосвязей связывания промотора TF в дрожжах в стандартных условиях роста (6).Он также использовался в клетках млекопитающих для идентификации прямых мишеней для нескольких TFs по всему геному (8-10). Поиск прямых целей c-Myc, Ли и др. . (8) идентифицировали 776 генов человека в клетках лимфомы Беркитта, промоторы которых связаны с онкопротеином c-Myc и его гетеродимерным партнером Макс. c-Myc регулирует пролиферацию, апоптоз и дифференцировку клеточного цикла. Сверхэкспрессия c-Myc является одним из наиболее частых изменений при раке человека, однако неясно, как он способствует злокачественной трансформации (11–14).Широко признано, что активность c-Myc по регуляции транскрипции является критической для развития связанных с ним злокачественных новообразований, но гены-мишени, которые опосредуют этот процесс, остаются неуловимыми.

    Регуляция транскрипции эукариотических генов в значительной степени комбинаторная, т. Е. Условия, при которых экспрессируется ген, определяются с помощью сложного взаимодействия множества положительных и отрицательных регуляторов транскрипции, которые распознают и связываются с цис -регуляторными элементами внутри и за пределами промоторной области гена.Следовательно, основная цель дешифровки сетей регуляции транскрипции состоит в том, чтобы идентифицировать комбинации TF, которые функционально взаимодействуют с образованием регуляторных модулей. Такие модули можно распознать по совместному появлению соответствующих сайтов связывания TF в одних и тех же промоторах (1,15,16). Наша цель в этой работе – идентифицировать TF, которые образуют повторяющиеся cis -регуляторные модули с c-Myc. С этой целью мы компьютерно проанализировали промоторы, описанные Li et al . (8) быть связанными c-Myc.Мы сообщаем о девяти TF, сигнатуры связывания которых значительно превышены в этом наборе промоторов, включая несколько TF, которые, как известно, играют важную роль в регуляции прогрессирования клеточного цикла. Результаты указывают на возможные функциональные связи между этими TF и ​​c-Myc и предлагают дополнительное объяснение положительного эффекта c-Myc на пролиферацию клеток. Другой ТФ, сигнатура связывания которого была высоко обогащена промоторами-мишенями c-Myc, – это EGR-1, который быстро активируется многими типами стресса, включая гипоксию, повреждение ДНК и повреждение сосудов, и играет центральную роль в ангиогенезе (17,18). ).Мы экспериментально демонстрируем, что c-Myc и EGR-1 связывают вместе несколько общих целевых промоторов. Применяемый здесь подход является общим и демонстрирует потенциал вычислительного промоторного анализа данных ChIP-on-chip для идентификации новых транскрипционных модулей.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Извлечение предполагаемых промоторных последовательностей из геномов человека и мыши

    Предполагаемые промоторные последовательности, соответствующие всем известным генам человека и мыши, были извлечены из последовательностей генома человека и мыши (Ensembl, версия 13, декабрь 2002 г.) с использованием сценария Perl на основе интерфейса прикладного программирования, предоставленного проектом Ensembl (19).Для каждого гена, помеченного как «известный ген», была извлечена геномная последовательность, охватывающая от 1000 п.н. выше до 200 п.н. ниже предполагаемого сайта начала транскрипции (TSS). Извлеченные последовательности были замаскированы для повторяющихся элементов. Всего из генома человека и мыши было извлечено 19 351 и 18 748 предполагаемых промоторов соответственно. Последовательности этих наборов промоторов можно загрузить с http://www.cs.tau.ac.il/~rshamir/prima/PRIMA.htm.

    Чтобы избежать систематических ошибок из-за очень схожих промоторов, мы создали для каждого организма неизбыточный набор промоторов, выполнив сравнения BLAST «все против всех».Для каждой пары промоторов с оценкой BLAST E <10 −50 мы исключили один из членов из неизбыточного набора. Неизбыточные наборы промоторов человека и мыши содержат 17 390 и 15 521 промотор соответственно.

    Вычислительная идентификация обогащенных ТФ

    Для вычислительного анализа использовалось программное обеспечение PRIMA, которое подробно описано в (16) и доступно по адресу http://www.cs.tau.ac.il/~rshamir/prima/PRIMA.htm. Короче говоря, при заданном целевом и фоновом наборах промоторов PRIMA выполняет статистические тесты, направленные на идентификацию TF, сайты связывания которых значительно больше в целевом наборе, чем в фоновом наборе.PRIMA использует матрицы весовых коэффициентов позиции (PWM) в качестве моделей для регуляторных сайтов, связанных с TF. Всего из базы данных TRANSFAC было получено 300 PWM, которые представляют сайты связывания TF человека или мыши (20). Вся коллекция неизбыточных промоторов человека использовалась в качестве фонового набора в тестах PRIMA. Для анализа ортологов мыши в качестве фонового набора использовалась вся коллекция неизбыточных промоторов мыши. Гены-гомологи человека и мыши определяли с помощью служебной программы EnsMart, предоставленной Ensembl (21).Параметры по умолчанию использовались во всех запусках PRIMA. Программа просканировала обе нити каждого промотора на предмет предполагаемых сайтов связывания, то есть сайтов с высоким показателем сходства с PWM. В тексте мы называем сайты с высокими показателями «попадания» в соответствующий TF. Пороги оценок сходства для объявления совпадений соответствуют средней скорости одного совпадения на 10 000 п.н. случайных последовательностей промотора (16).

    Анализы ChIP

    Клеточная линия, используемая для всех анализов ChIP, представляла собой клетки миелогенного лейкоза человека K562.Клетки выращивали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки и антибиотиков. Клетки, растущие в логарифмической фазе, были сшиты формальдегидом, и хроматин подвергался иммунопреципитации, как описано ранее (22). Аликвота 2 мкг кроличьих поликлональных антител c-Myc и HGF (anti-Myc sc-764, anti-HGF sc-7949; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Санта-Крус, Калифорния) и 5 ​​мкг кроличьих поликлональных Egr-1 антитела (sc-189; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) использовали для осаждения хроматина из 2 × 10 7 клеток.

    ПЦР в реальном времени

    Для ПЦР в реальном времени использовали набор реактивов SYBR green core (Applied Biosystems). Известные количества общей вводимой ДНК использовали для построения стандартной кривой для определения процента от общего ввода для каждого образца ChIP. Все амплификации проводились в линейном диапазоне стандартных кривых.

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Расширенные подписи TF в промоторах, связанных c-Myc / Max

    Набор данных, недавно опубликованный Ли и др. .(8) содержали 876 промоторов человека, которые были связаны с c-Myc, 931 промотор, который был связан с промоторами Max, и 776 промоторов, которые были связаны с обоими ТФ. Чтобы уменьшить количество ложноположительных открытий, мы сосредоточились на наборе промоторов, которые были связаны как c-Myc, так и Max, в дальнейшем именуемым целевым набором c-Myc / Max. В качестве первого шага мы извлекли из генома человека последовательности, соответствующие промоторам всех известных генов (подробности см. В разделе «Материалы и методы»), ограничив анализ последовательностями, охватывающими от 1000 п.н. выше до 200 п.н. ниже предполагаемых TSS соответствующих генов. .Мы определили область последовательности вокруг предполагаемого TSS, в которой нужно искать элементы регуляции транскрипции, исследуя распределение местоположений 1075 эмпирически подтвержденных сайтов связывания TF в промоторах человека [данные из базы данных TRANSFAC (20)]. Восемьдесят процентов этих элементов попали в область нашего анализа (данные не показаны). Очевидно, что имеющиеся экспериментальные данные по сайтам связывания TF смещены в сторону сайтов связывания, расположенных на небольших расстояниях от TSS. Хотя было продемонстрировано, что определенные регуляторные элементы действуют на больших расстояниях, вплоть до нескольких килобаз от TSS, ясно, что обширная информация о механизмах регуляции транскрипции находится в последовательностях в непосредственной близости от TSS.

    Наша коллекция промоторных последовательностей человека содержит в общей сложности 19 351 промотор, из которых подмножество из 17 390 промоторов не является избыточным (см. Материалы и методы). Полный и неизбыточный наборы промоторов включают данные последовательности для 615 и 519 генов, соответственно, из 776 генов в наборе мишеней Myc / Max. Мы применили PRIMA, программное обеспечение для анализа промоторов, которое мы разработали недавно (16), для сканирования 519 неизбыточных промоторов целевого набора Myc / Max на предмет чрезмерно представленных сигнатур сайтов связывания TF.Это означает, что мы провели поиск TF, сигнатуры сайтов связывания которых значительно больше в этом наборе промоторов, чем ожидалось случайно, учитывая их изобилие во всей коллекции неизбыточных промоторов человека (подробности о PRIMA см. В разделе «Материалы и методы»). Такое чрезмерное представительство предполагает наличие функциональных связей между избыточным количеством TF и ​​c-Myc / Max. PRIMA использует PWM как модели регулирующих сайтов, связанных с TF. Всего было протестировано 300 PWM, которые представляют сайты связывания TF млекопитающих (полученные из базы данных TRANSFAC), и девять из них были идентифицированы PRIMA как значительно обогащенные набором мишеней c-Myc / Max [ P <10 −5 , и после консервативной корректировки для множественных испытаний P <0.05; Таблица 1, (А)].

    Таблица 1.

    обогащения сигнатур сайта связывания TF в наборах мишеней c-Myc / Max

    54

    Необогащенный 915r35 11558 E M00243]
    TF [идентификатор доступа PWM в БД TRANSFAC]
    .
    (A) P -значение количества совпадений ШИМ на наборе целей c-Myc / Max
    .
    (B) P -значение количества совпадений ШИМ на наборе ортологов мыши
    .
    (C) P -значение количества совпадений ШИМ в подмножестве режима 1
    .
    ETF [M00695] 1,2 × 10 −15 6,8 × 10 −13 3,2 × 10 −7
    Sp1 Sp1 9 [M00199 −14 8,9 × 10 −12 6,3 × 10 −10
    Nrf-1 [M00652] 6,5 × 10 −14 7,911 3,2 × 10 −7
    NF-Y [M00185] 3.2 × 10 −12 Необогащенный 1,5 × 10 −5
    CREB [M00177] 4,7 × 10 −8 1,4 × 10 −7
    c-Myc / Max [M00322] 1,5 × 10 −7 2,8 × 10 −6 5,7 × 10 −62 a
    2,4 × 10 -7 6.7 × 10 −5 3,4 × 10 −8
    Elk-1 [M00025] 3,9 × 10 −7 5,5 × 10 −11 Необогащенный
    E2F [M00516] 5,8 × 10 −7 6,6 × 10 −5 Необогащенный
    AhR / Arnt [M00237] 6,4 × 10 6,4 × 10 обогащенный Необогащенный
    Электронный ящик 8.4 × 10 −4 4,1 × 10 −5 6,5 × 10 −7

    54

    Необогащенный 915r35 11558 E M00243]
    TF [ID доступа PWM в БД TRANSFAC]
    .
    (A) P -значение количества совпадений ШИМ на наборе целей c-Myc / Max
    .
    (B) P -значение количества совпадений ШИМ на наборе ортологов мыши
    .
    (C) P -значение количества совпадений ШИМ в подмножестве режима 1
    .
    ETF [M00695] 1,2 × 10 −15 6,8 × 10 −13 3,2 × 10 −7
    Sp1 Sp1 9 [M00199 −14 8,9 × 10 −12 6,3 × 10 −10
    Nrf-1 [M00652] 6,5 × 10 −14 7,911 3,2 × 10 −7
    NF-Y [M00185] 3.2 × 10 −12 Необогащенный 1,5 × 10 −5
    CREB [M00177] 4,7 × 10 −8 1,4 × 10 −7
    c-Myc / Max [M00322] 1,5 × 10 −7 2,8 × 10 −6 5,7 × 10 −62 a
    2,4 × 10 -7 6.7 × 10 −5 3,4 × 10 −8
    Elk-1 [M00025] 3,9 × 10 −7 5,5 × 10 −11 Необогащенный
    E2F [M00516] 5,8 × 10 −7 6,6 × 10 −5 Необогащенный
    AhR / Arnt [M00237] 6,4 × 10 6,4 × 10 обогащенный Необогащенный
    Электронный ящик 8.4 × 10 −4 4,1 × 10 −5 6,5 × 10 −7
    Таблица 1.

    Обогащение подписи сайта связывания TF в наборах целей c-Myc / Max

    54

    [M1559 10 −5
    TF [Идентификатор доступа PWM в БД TRANSFAC]
    .
    (A) P -значение количества совпадений ШИМ на наборе целей c-Myc / Max
    .
    (B) P -значение количества совпадений ШИМ на наборе ортологов мыши
    .
    (C) P -значение количества совпадений ШИМ в подмножестве режима 1
    .
    ETF [M00695] 1,2 × 10 −15 6,8 × 10 −13 3,2 × 10 −7
    Sp1 Sp1 9 [M00199 −14 8,9 × 10 −12 6,3 × 10 −10
    Nrf-1 [M00652] 6.5 × 10 −14 7,9 × 10 −11 3,2 × 10 −7
    NF-Y [M00185] 3,2 × 10 −12 Необогащенное 1,5 × 10 −5
    CREB [M00177] 4,7 × 10 −8 1,4 × 10 −7 Без обогащения
    c-Myc322 / Макс 1,5 × 10 −7 2,8 × 10 −6 5.7 × 10 −62 a
    Egr-1 [M00243] 2,4 × 10 −7 6,7 × 10 −5 3,4 × 10 −8

    4
    Элк-1 [M00025] 3,9 × 10 −7 5,5 × 10 −11 Необогащенный
    E2F [M00516] 5,8 × 10 −7 6338 Необогащенный
    AhR / Arnt [M00237] 6.4 × 10 −7 Необогащенный Необогащенный
    Электронный ящик 8,4 × 10 −4 4,1 × 10 −5 6.5 × 10

    5 −7

    54

    [M1559 10 −5
    TF [идентификатор доступа PWM в БД TRANSFAC]
    .
    (A) P -значение количества совпадений ШИМ на наборе целей c-Myc / Max
    .
    (B) P -значение количества совпадений ШИМ на наборе ортологов мыши
    .
    (C) P -значение количества совпадений ШИМ в подмножестве режима 1
    .
    ETF [M00695] 1,2 × 10 −15 6,8 × 10 −13 3,2 × 10 −7
    Sp1 Sp1 9 [M00199 −14 8,9 × 10 −12 6,3 × 10 −10
    Nrf-1 [M00652] 6.5 × 10 −14 7,9 × 10 −11 3,2 × 10 −7
    NF-Y [M00185] 3,2 × 10 −12 Необогащенное 1,5 × 10 −5
    CREB [M00177] 4,7 × 10 −8 1,4 × 10 −7 Без обогащения
    c-Myc322 / Макс 1,5 × 10 −7 2,8 × 10 −6 5.7 × 10 −62 a
    Egr-1 [M00243] 2,4 × 10 −7 6,7 × 10 −5 3,4 × 10 −8

    4
    Элк-1 [M00025] 3,9 × 10 −7 5,5 × 10 −11 Необогащенный
    E2F [M00516] 5,8 × 10 −7 6338 Необогащенный
    AhR / Arnt [M00237] 6.4 × 10 −7 Необогащенный Необогащенный
    Электронный ящик 8,4 × 10 −4 4,1 × 10 −5 6.5 × 10

    5 −7

    Ранее мы использовали PRIMA для анализа генов человека, экспрессия которых зависит от клеточного цикла (16). Интересно, что большинство TF, сигнатуры которых были обогащены набором промоторов, зависящих от клеточного цикла, также были обогащены целевым набором c-Myc / Max (E2F, NF-Y, Sp1, Nrf1, ETF, CREB и AhR / Arnt). .Поэтому мы проверили перекрытие между клеточным циклом и целевыми наборами c-Myc / Max. Набор клеточного цикла содержит 568 генов, только 30 из которых являются общими для набора c-Myc / Max. Когда мы проанализировали набор c-Myc / Max после удаления этих 30 генов, чрезмерная представленность всех TF, представленных в таблице 1, оставалась значительной (данные не показаны). Таким образом, совпадение результатов, полученных на двух наборах данных, не объясняется общими генами и, вероятно, связано с общей ролью этих регуляторов в развитии клеточного цикла, где они контролируют разные наборы генов в разных типах клеток.ТФ ELK-1 и EGR-1, индуцированные митогеном и стрессом, также обогащались целевым набором Myc / Max.

    Ли и др. . (8) сообщили, что несколько неожиданно, что только около 25% промоторов, связанных c-Myc / Max, содержат основной мотив E-box (CACGTG), который непосредственно распознается и связывается гетеродимером c-Myc / Max. В соответствии с этим наблюдением PRIMA обнаружила, что ШИМ с каноническими мотивами ядра E-box лишь немного обогащены целевым набором Myc / Max, и они не преодолели наш порог значимости.Однако другой PWM, моделирующий сайты связывания c-Myc / Max, основной мотив которого является вариантом E-бокса (CAYGYG, Y = {C, T}), был значительно обогащен этим целевым набором (PWM M00322 в TRANSFAC DB ) [Таблица 1, (A)]. Не исключено, что нам не удалось обнаружить чрезмерное количество E-боксов в результате того, что часть этих регуляторных элементов расположена за пределами анализируемой области промотора.

    Сохранение обогащения сайтов связывания TF на промоторах ортологов мыши

    Обогащение сигнатур сайтов связывания конкретных TF в наборе мишеней c-Myc / Max повышает вероятность того, что c-Myc / Max и TF поддерживают функциональные отношения и вместе образуют рекуррентные модули регуляции транскрипции, которые контролируют экспрессию многочисленных генов.Чтобы усилить эту гипотезу, производную от in silico , мы повторили тесты на обогащение сайта связывания TF, на этот раз на наборе промоторов, включающих ортологи мыши из набора мишеней c-Myc / Max человека. Извлекая промоторные последовательности для всех известных генов мыши, мы собрали 18 478 промоторных последовательностей мыши, из которых 15 521 не повторялись. Неизбыточный набор включает данные последовательности для 407 ортологов мыши из набора мишеней Myc / Max человека. Применяя PRIMA к этому набору, мы обнаружили, что семь из девяти ШИМ, которые были обогащены в наборе человека, также были обогащены наборе мыши [Таблица 1, (B)].Обогащение одних и тех же сайтов связывания TF в наборах ортологов предполагает, что функциональные отношения между этими TF сохраняются между мышами и людьми.

    TF, связанные с c-Myc / Max посредством прямого связывания ДНК

    Как отмечалось выше, канонический E-box обнаруживается только в ~ 25% промоторов, идентифицированных Li et al . (8) как прямые мишени c-Myc / Max. Поэтому было высказано предположение, что гетеродимер c-Myc / Max контролирует свою мишень двумя разными способами: в первом он напрямую связывает свои промоторы-мишени через свой классический элемент E-box или его вариант; и во втором режиме он участвует в регуляции промоторов-мишеней, не связываясь непосредственно с ДНК, но физически взаимодействуя с другими последовательностями ТФ или с компонентами общего аппарата транскрипции.

    Мы попытались идентифицировать TF, которые образуют cis -регулирующие модули с c-Myc / Max через первый режим. С этой целью мы идентифицировали подмножество целевого набора c-Myc / Max, включающее гены, промоторы которых содержат предполагаемые сайты связывания с высокими показателями ( совпадений, ) для c-Myc / Max. Поскольку элемент связывания варианта c-Myc / Max, представленный PWM M00322, был более обогащен, чем канонический E-box, мы просканировали целевой набор c-Myc / Max на предмет промоторов с совпадениями для этого PWM. Мы определили совпадения для M00322 в 134 из 615 промоторов, которые были хорошими кандидатами на то, чтобы регулироваться c-Myc / Max через его прямое связывание с ДНК (дополнительная таблица A).Мы называем это подмножество «c-Myc / Max mode1 subset». Поскольку он меньше, чем полный набор целевых значений c-Myc / Max, мы ожидали, что статистические явления, связанные с ним, будут менее значимыми. Однако мы заметили, что один TF, EGR-1, был даже более значительно обогащен подмножеством mode1, чем полным набором [Таблица 1, (C)]. Это делает EGR-1 сильным кандидатом на роль партнера c-Myc / Max в регулировании целевых промоторов mode1. Следует отметить, что E2F, основной регулятор программы транскрипции, ассоциированной с прогрессированием клеточного цикла, не был обогащен субнабором mode1, это указывает на то, что сотрудничество c-Myc / Max с E2F поддерживается в основном посредством режима 2.

    Обогащение сайта связывания EGR-1 в GC-rich c-Myc / Max mode1 subset

    Как отмечалось выше, сигнатура сайта связывания EGR-1 была более обогащена в подмножестве c-Myc / Max mode1, чем в полном наборе c-Myc / Max. Проверка ШИМ EGR-1 (M00243) показала, что он имеет высокое содержание GC с ядром GCGTGGG. Это привело нас к сравнению GC-содержимого поднабора mode1, целевого набора c-Myc / Max и полного набора неизбыточных промоторов человека (таблица 2). Мы заметили, что набор мишеней c-Myc / Max более богат на GC, чем полный набор промоторов человека (57 против 53%, соответственно, Z -счет = 9.4), и что подмножество c-Myc / Max mode1 еще более богато GC (60,1%, Z -оценка = 5,8 по сравнению с GC-содержанием целевого набора c-Myc / Max). Это вызвало вопрос, можно ли объяснить количество совпадений для EGR-1 в подмножестве режима 1 просто его высоким содержанием GC. Чтобы решить эту проблему, мы сгенерировали случайные ШИМ на основе ШИМ EGR-1 таким образом, чтобы сохранить его содержимое GC. Мы сгенерировали случайные ШИМ, переставляя столбцы исходной ШИМ и случайным образом меняя местами A с T и G с C.Затем мы сравнили обогащение пяти пермутированных и исходной ШИМ EGR-1 на подмножестве c-Myc / Max mode1. Примечательно, что исходный PWM EGR-1 дал оценку обогащения, которая была намного более значимой, чем оценки, полученные с помощью случайных PWM, сгенерированных на ее основе (Таблица 3). Для дальнейшего изучения мы отсортировали все ШИМ млекопитающих TRANSFAC в соответствии с их GC-содержанием и зарегистрировали их обогащение в подмножестве mode1. В дополнительной таблице B перечислены результаты для 25 лучших ШИМ с высоким содержанием GC. Этот список показывает, что чрезмерная представленность EGR-1 в подмножестве mode1 не является простым отражением его высокого содержания GC, поскольку существует много PWM, по крайней мере, таких же GC-богатых, как EGR-1, которые совсем не обогащены этим. подмножество.

    Таблица 2.

    High-GC-content поднабора c-Myc / Max mode1

    9155 9155 915 915 915 915 915 134

    .
    Количество промоутеров
    .
    % А
    .
    % С
    .
    % G
    .
    % Т
    .
    Неизбыточные человеческие промоторы 17390 23.1 26,4 27,0 23,5
    c-Myc / Максимальный целевой набор 615 21,5 28,3 28,7 21,6
    19,5 30,4 30,5 19,7
    923 970 315 970 ,315 970 ,315

    .
    Количество промоутеров
    .
    % А
    .
    % С
    .
    % G
    .
    % Т
    .
    Неизбыточные человеческие промоторы 17 390 23,1 26,4 27,0 23,5
    c-Myc / Max целевой набор 21,6
    c-Myc / Max режим 1 подмножество 134 19.5 30,4 30,5 19,7
    Таблица 2.

    Высокое содержание GC в подмножестве c-Myc / Max mode1

    9155 9155 915 915 915 915 915 134

    .
    Количество промоутеров
    .
    % А
    .
    % С
    .
    % G
    .
    % Т
    .
    Неизбыточные человеческие промоторы 17390 23.1 26,4 27,0 23,5
    c-Myc / Максимальный целевой набор 615 21,5 28,3 28,7 21,6
    19,5 30,4 30,5 19,7
    923 970 315 970 ,315 970 ,315

    .
    Количество промоутеров
    .
    % А
    .
    % С
    .
    % G
    .
    % Т
    .
    Неизбыточные человеческие промоторы 17 390 23,1 26,4 27,0 23,5
    c-Myc / Max целевой набор 21,6
    c-Myc / Max режим 1 подмножество 134 19.5 30,4 30,5 19,7
    Таблица 3.

    Расширение исходной и измененной ШИМ EGR-1 в подмножестве c-Myc / Max mode 1

    PWM
    .
    EGR-1
    .
    EGR-1 Rand1
    .
    EGR-1 Rand2
    .
    EGR-1 Rand3
    .
    EGR-1 Rand4
    .
    EGR-1 Rand5
    .
    Оценка обогащения 4,5 × 10 −7 0,17 0,28 0,25 0,088 0,0034
    .
    EGR-1
    .
    EGR-1 Rand1
    .
    EGR-1 Rand2
    .
    EGR-1 Rand3
    .
    EGR-1 Rand4
    .
    EGR-1 Rand5
    .
    Оценка обогащения 4,5 × 10 −7 0,17 0,28 0,25 0,088 0,0034
    Таблица обогащения для исходной таблицы 3. 1 ШИМ в режиме c-Myc / Max 1 подмножество

    ШИМ
    .
    EGR-1
    .
    EGR-1 Rand1
    .
    EGR-1 Rand2
    .
    EGR-1 Rand3
    .
    EGR-1 Rand4
    .
    EGR-1 Rand5
    .
    Оценка обогащения 4,5 × 10 −7 0,17 0,28 0,25 0,088 0,0034
    . 917c24

    c High-scoring (макс. и EGR-1 (M00243) были обнаружены в 134 и 167 промоторах соответственно из 615 промоторов в целевом наборе c-Myc / Max.Всего 54 промотора содержали сильные попадания как для c-Myc / Max, так и для EGR-1 (дополнительная таблица C). Наконец, мы исследовали распределение местоположений совпадений c-Myc / Max и EGR-1 на промоторах целевого набора c-Myc / Max. Для обоих TF идентифицированные с помощью вычислений сайты связывания в значительной степени сконцентрированы в непосредственной близости от TSS, и их плотность падает ниже по потоку (рис. 1). Напротив, распределение совпадений, идентифицированных для случайного ШИМ, сгенерированного перестановкой ШИМ EGR-1, было довольно равномерным между -650 и +200 п.о. по отношению к TSS, как и ожидалось для случайных совпадений.Тот факт, что распределения совпадений для c-Myc / Max и EGR-1 показывают заметный пик в ожидаемом положении, является дополнительным показателем качества TSS-аннотаций генома человека (такие пики не были бы получены, если бы существовали значительные отклонения. между местоположениями аннотированного и реального TSS в большой части генов), а также для специфичности совпадений, идентифицированных PRIMA (высокие уровни ложных срабатываний для совпадений, идентифицированных PRIMA, скрыли бы пик истинных совпадений).

    Рисунок 1.

    Распределение местоположений попаданий для целевого набора c-Myc / Max и EGR-1 на промоторах целевого набора c-Myc / Max. Промоторная область, охватывающая от 1000 п.н. выше до 200 п.о. ниже TSS, была разделена на 10 бункеров по 120 п.н. График представляет относительную частоту совпадений по ячейкам для c-Myc / Max (M00322), EGR-1 (M00243) и для случайной ШИМ, полученной из ШИМ EGR-1, как объяснено в тексте. Количество совпадений в каждой ячейке было нормализовано по эффективной длине последовательности, сканированной в ячейке (эффективная длина может быть разной в разных ячейках из-за маскировки повторяющихся элементов в промоторах).Таковыми засчитывались множественные попадания в промоутеры.

    Рисунок 1.

    Распределение местоположений попаданий для целевого набора c-Myc / Max и EGR-1 на промоторах целевого набора c-Myc / Max. Промоторная область, охватывающая от 1000 п.н. выше до 200 п.о. ниже TSS, была разделена на 10 бункеров по 120 п.н. График представляет относительную частоту совпадений по ячейкам для c-Myc / Max (M00322), EGR-1 (M00243) и для случайной ШИМ, полученной из ШИМ EGR-1, как объяснено в тексте. Количество совпадений в каждой ячейке было нормализовано по эффективной длине последовательности, сканированной в ячейке (эффективная длина может быть разной в разных ячейках из-за маскировки повторяющихся элементов в промоторах).Таковыми засчитывались множественные попадания в промоутеры.

    Экспериментальное подтверждение совместного связывания Myc и EGR-1 в выбранных промоторах

    Всего 54 промотора подмножества c-Myc / Max mode1 содержали сильные совпадения для EGR-1. Чтобы экспериментально проверить нашу гипотезу, основанную на in silico , о том, что эти два ТФ вместе образуют рекуррентный транскрипционный регуляторный модуль цис , мы выбрали шесть из этих генов и исследовали связывание как c-Myc, так и EGR-1 с их промоторами с помощью ChIP. анализы.Для всех шести исследованных генов ( RAP2B , KHSRP , PolH , PTPN1 , PP и KPNA3 ) сигналы, полученные как для c-Myc, так и для EGR-1, были выше фонового уровня ( P <0,025, односторонний t -тест; Рисунок 2). Для отрицательного контроля мы выбрали из набора мишеней c-Myc / Max ген MCCC2 , промотор которого не содержал попаданий для EGR-1. В соответствии с этим сигнал, полученный с помощью анализа ChIP для связывания EGR-1 с этим промотором, был очень близок к фоновому уровню.Эти результаты демонстрируют, что совместное связывание c-Myc и EGR-1 происходит на нескольких промоторах. Для установления прямой функциональной связи между этими двумя регуляторами транскрипции потребуются дальнейшие эксперименты.

    Рисунок 2.

    ЧИП мишеней c-Myc и EGR-1 в клетках K562. Каждый график представляет ПЦР-амплификацию в реальном времени промоторных и контрольных областей каждого гена с использованием хроматина против Myc, анти-EGR-1, анти-HGF и осажденного антителами хроматина в качестве матрицы.Столбики представляют собой процент от общего количества введенной ДНК для каждого образца ChIP, усредненный по трем ПЦР. Планки погрешностей представляют 1 стандартное отклонение. Горизонтальная сплошная линия представляет 0,02% общей входящей ДНК, фоновый сигнал для этого анализа. Получены сигналы связывания c-Myc и EGR-1 с промоторными областями всех шести исследованных генов ( RAP2B , KHSRP , PolH , PTPN1 , PP и KPNA3 ), но не для отрицательного контроля, MCCC2, были выше фонового уровня ( P, <0.025, односторонний т -тест). Последовательности и положения праймеров, а также положения предполагаемых попаданий для c-Myc и EGR-1 на исследованных промоторах приведены в дополнительной таблице D.

    Рисунок 2.

    ChIP мишеней c-Myc и EGR-1 в К562 клетки. Каждый график представляет ПЦР-амплификацию в реальном времени промоторных и контрольных областей каждого гена с использованием хроматина против Myc, анти-EGR-1, анти-HGF и осажденного антителами хроматина в качестве матрицы. Столбики представляют собой процент от общего количества введенной ДНК для каждого образца ChIP, усредненный по трем ПЦР.Планки погрешностей представляют 1 стандартное отклонение. Горизонтальная сплошная линия представляет 0,02% общей входящей ДНК, фоновый сигнал для этого анализа. Получены сигналы связывания c-Myc и EGR-1 с промоторными областями всех шести исследованных генов ( RAP2B , KHSRP , PolH , PTPN1 , PP и KPNA3 ), но не для отрицательного контроля, MCCC2, были выше фонового уровня ( P <0,025, односторонний t -тест). Последовательности и положения праймеров, а также положения предполагаемых попаданий для c-Myc и EGR-1 на исследованных промоторах приведены в дополнительной таблице D.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Механизмы, с помощью которых c-Myc способствует росту и трансформации клеток, плохо изучены, но несколько линий доказательств предполагают, что его функция в качестве регулятора транскрипции необходима для его способности способствовать развитию злокачественных новообразований. Поскольку регуляция транскрипции часто является результатом комбинаторного взаимодействия между различными TF, мы попытались идентифицировать TF, которые образуют повторяющиеся cis -регуляторные модули с c-Myc. С этой целью мы проанализировали общедоступный набор данных промоторов человека, которые связываются c-Myc / Max в клетках лимфомы Беркитта.Наш вычислительный анализ выявил девять TF, сигнатуры сайтов связывания которых значительно превышены в этом наборе промоторов. Большинство этих TF также были обогащены набором ортологов мышиных промоторов-мишеней c-Myc, что свидетельствует о консервативной биологической функции, опосредованной взаимодействием c-Myc и этих TF.

    Среди TF, обогащенных набором целевых промоторов c-Myc / Max, были основные регуляторы транскрипционной программы, связанной с развитием клеточного цикла, E2F и NF-Y.Обогащение сигнатур сайтов связывания этих факторов промоторами, которые связываются c-Myc / Max, предполагает функциональные связи между ними и c-Myc. Функциональные связи между c-Myc и E2F хорошо задокументированы (23–26). Myc способствует развитию клеточного цикла за счет координированной активации генов, управляющих клеточным циклом (например, Cdc25A , Cdk4 и Cyclins D2 , E и A ), а также путем подавления генов остановки клеточного цикла (например, как p15 , p21 , p27 и GADD s) (24).Некоторые из генов, способствующих клеточному циклу, являются общими мишенями для c-Myc и членов ТФ семейства E2F (27). Недавно сообщалось о физической связи между c-Myc и E2F-6, которая играет роль в поддержании клеточного покоя (28). Что касается связи между c-Myc и NF-Y, физическое взаимодействие между c-Myc и субъединицами NF-YB и NF-YC тримера NF-Y было продемонстрировано ранее (29), и, в частности, эти взаимодействия являются важен для подавления хорошо известной мишени c-Myc, PDGFRb (30).Вычислительная идентификация модулей cis не может расшифровать регулирующий эффект модуля. Обнаружение отрицательного эффекта модуля c-Myc / NF-Y на транскрипцию PDGFRb подчеркивает важность дальнейших исследований, которые выходят за рамки нашего текущего исследования, чтобы установить, существует ли функциональное взаимодействие между предсказанными TF и ​​результатами c-Myc. в отрицательной или положительной регуляции генов-мишеней.

    В дополнение к примерам, изложенным выше, мы стремились определить, связывает ли EGR-1 промоторы, которые, по прогнозам in silico, содержат консенсусные сайты EGR-1 вместе с сайтами связывания c-Myc.Учитывая, что анализы транзиторной трансфекции промотор-репортер, со специфической ссылкой на c-Myc, по своей природе зашумлены и зависят от типов клеток, а также от плотности клеток и других факторов, мы выбрали ChIP-анализы, чтобы определить, насколько наш in silico предсказывает EGR1. привязка может быть подтверждена. Экспериментальные данные подтверждают предположение, что эти два TF вместе образуют модуль регуляции транскрипции cis , который повторяется на нескольких промоторах.

    Возможность функциональных связей между c-Myc и EGR-1 интригует из-за ключевой роли EGR-1 в ангиогенезе, формировании новых кровеносных сосудов из ранее существовавшей сосудистой сети.Неконтролируемый ангиогенез играет важную роль в росте опухоли, и прорастание новых кровеносных сосудов в опухоли предполагает, что ангиогенез необходим для прогрессирования злокачественного новообразования. Недавние сообщения подчеркнули критическую роль как EGR-1, так и c-Myc в ангиогенезе. Фахми и др. . (17) сообщили, что ингибирование экспрессии EGR-1 подавляло неоваскуляризацию и блокировало ангиогенез и рост опухоли на моделях мышей и крыс. Баудино и др. . (31) сообщили, что c-Myc также необходим для правильной экспрессии нескольких основных ангиогенных факторов, и что способность c-Myc (- / -) ES-клеток к образованию опухолей у мышей с ослабленным иммунитетом значительно нарушена, а небольшие опухоли, которые действительно развиваются, плохо васкуляризированы.Здесь мы предложили возможное синергетическое действие между c-Myc и EGR-1 в регуляции транскрипции целевых генов и экспериментально продемонстрировали связывание как c-Myc, так и EGR-1 с несколькими целевыми промоторами.

    Применяемый здесь подход является общим и демонстрирует возможности вычислительного анализа для выяснения новых функциональных связей в транскрипционных сетях на основе данных функциональной геномики.

    ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ МАТЕРИАЛ

    Дополнительные материалы доступны в NAR Online.

    R.E. является научным сотрудником Джозефа Сассуна. Эта работа частично поддержана исследовательским грантом Министерства науки и технологий Израиля (Y.S. и R.S.) и грантами NIH R01CA057341 (C.V.D.) и T32HL07525 (K.I.Z.). Работа выполнена при частичном выполнении требований к соисканию ученой степени доктора философии Р.Е.

    ССЫЛКИ

    1.

    Pilpel, Y., Sudarsanam, P. и Чёрч, G.M. (

    2001

    ) Идентификация регуляторных сетей комбинаторным анализом промоторных элементов.

    Nature Genet.

    ,

    29

    ,

    153

    –159.2.

    Сегал, Э., Шапира, М., Регев, А., Пеер, Д., Ботштейн, Д., Коллер, Д. и Фридман Н. (

    2003

    ) Модульные сети: определение регуляторных модулей и их регуляторов, зависящих от состояния, на основе данных по экспрессии генов.

    Nature Genet.

    ,

    34

    ,

    166

    –176.3.

    Сегал, Е., Еленский, р. и Коллер, Д. (

    2003

    ) Общегеномное открытие транскрипционных модулей из последовательности ДНК и экспрессии генов.

    Биоинформатика

    ,

    19

    (Приложение 1),

    i273

    –i282.4.

    Тавазой, С., Хьюз, Дж. Д., Кэмпбелл, М. Дж., Чо, Р. Дж. и Чёрч, G.M. (

    1999

    ) Систематическое определение архитектуры генетической сети.

    Nature Genet.

    ,

    22

    ,

    281

    –285,5.

    Локхарт, Д.Дж. и Winzeler, E.A. (

    2000

    ) Геномика, экспрессия генов и массивы ДНК.

    Природа

    ,

    405

    ,

    827

    –836,6.

    Ли, Т.И., Ринальди, штат Нью-Джерси, Роберт, Ф., Одом, Д. Т., Бар-Джозеф, З., Гербер, Г. К., Ханнет, Н. М., Харбисон, К. Т., Томпсон, К. М., Саймон, И. и др. . (

    2002

    ) Сети регуляции транскрипции в Saccharomyces cerevisiae .

    Наука

    ,

    298

    ,

    799

    –804.7.

    Рен, Б., Роберт, Ф., Вайрик, Дж. Дж., Апарисио, О., Дженнингс, Э. Г., Саймон, И., Цайтлингер, Дж., Шрайбер, Дж., Ханнет, Н., Канин, Э. и др. . (

    2000

    ) Положение и функция ДНК-связывающих белков по всему геному.

    Наука

    ,

    290

    ,

    2306

    –2309. 8.

    Ли, З., Ван Калькар, С., Цюй, К., Кавени, В.К., Чжан, М.К. и Рен, Б. (

    2003

    ) Глобальная регуляторная роль транскрипции c-Myc в клетках лимфомы Беркитта.

    Proc. Natl Acad. Sci. США

    ,

    100

    ,

    8164

    –8169,9.

    Рен Б., Кэм Х., Такахаши Ю., Фолькерт Т., Террагни Дж., Янг Р.А. и Динлахт Б.Д. (

    2002

    ) E2F объединяет развитие клеточного цикла с репарацией ДНК, репликацией и контрольными точками G 2 / M.

    Genes Dev.

    ,

    16

    ,

    245

    –256.10.

    Мартоне Р., Ойскирхен Г., Бертоне П., Хартман С., Ройс Т. Э., Ласкомб Н. М., Ринн Дж. Л., Нельсон Ф. К., Миллер П., Герштейн М. и др. . (

    2003

    ) Распределение сайтов связывания NF-kappaB по хромосоме 22 человека.

    Proc. Natl Acad. Sci. США

    ,

    100

    ,

    12247

    –12252.11.

    Nilsson, J.A. и Кливленд, J.L. (

    2003

    ) Пути Myc, провоцирующие самоубийство клеток и рак.

    Онкоген

    ,

    22

    ,

    9007

    –90 21.12.

    Пеленгарис, С., Хан, м. и Эван, Г. (

    2002

    ) c-MYC: больше, чем просто вопрос жизни и смерти.

    Nature Rev. Cancer

    ,

    2

    ,

    764

    –776.13.

    Коул, доктор медицины. и МакМахон, С. (

    1999

    ) Онкобелок MYC: критическая оценка трансактивации и регуляции целевого гена.

    Онкоген

    ,

    18

    ,

    2916

    –2924.14.

    Остер, С.К., Хо, К.С., Суси, Э.Л. и Пенн, Л.З. (

    2002

    ) Миконкоген: чудесный комплекс.

    Adv. Cancer Res.

    ,

    84

    ,

    81

    –154,15.

    Sudarsanam, P., Pilpel, Y. и Чёрч, G.M. (

    2002

    ) Совместное присутствие промоторных элементов по всему геному выявляет цис -регулирующую кассету мотивов транскрипции рРНК в Saccharomyces cerevisiae .

    Genome Res.

    ,

    12

    ,

    1723

    –1731,16.

    Элкон, Р., Линхарт, С., Шаран, Р., Шамир, Р. и Шайло, Ю. (

    2003

    ) Общегеномная in silico идентификация регуляторов транскрипции, контролирующих клеточный цикл в клетках человека.

    Genome Res.

    ,

    13

    ,

    773

    –780,17.

    Фахми, Р.Г., Дасс, К.Р., Сан, Л.К., Честерман, К.Н. и Хачигян Л. (

    2003

    ) Фактор транскрипции Egr-1 поддерживает FGF-зависимый ангиогенез во время неоваскуляризации и роста опухоли.

    Nature Med.

    ,

    9

    ,

    1026

    –1032.18.

    Thiel, G. и Cibelli, G. (

    2002

    ) Регулирование жизни и смерти фактором транскрипции цинкового пальца Egr-1.

    J. Cell. Physiol.

    ,

    193

    ,

    287

    –292,19.

    Бирни, Э., Эндрюс, Т. и др. . (

    2004

    ) Обзор Ensembl.

    Genome Res.

    ,

    14

    ,

    925

    –928.20.

    Матис В., Фрике Э., Гефферс Р., Госслинг, Э., Хауброк, М., Хел, Р., Хорнишер, К., Карас, Д., Кел, А.Э., Кел-Маргулис, О.В. и др. . (

    2003

    ) TRANSFAC: регуляция транскрипции, от паттернов к профилям.

    Nucleic Acids Res.

    ,

    31

    ,

    374

    –378,21.

    Каспршик, А., Киф, Д., Смедли, Д., Лондон, Д., Спунер, В., Мелсопп, К., Хаммонд, М., Рокка-Серра, П., Кокс, Т. и Бирни, Э. (

    2004

    ) EnsMart: универсальная система для быстрого и гибкого доступа к биологическим данным.

    Genome Res.

    ,

    14

    ,

    160

    –169,22.

    Целлер К.И., Джегга А.Г., Ароноу Б.Дж., О’Доннелл К.А. и Dang, C.V. (

    2003

    ) Интегрированная база данных генов, чувствительных к онкогенному транскрипционному фактору Myc: идентификация прямых геномных мишеней.

    Genome Biol.

    ,

    4

    ,

    R69

    . 23.

    Леоне, Дж., Сирс, Р., Хуанг, Э., Ремпель, Р., Наколлс, Ф., Парк, К. Х., Джангранде, П., Ву, Л., Сааведра, Х. И., Филд, С.Дж. и др. .(

    2001

    ) Myc требует различных активностей E2F для индукции S фазы и апоптоза.

    Мол. Мобильный

    ,

    8

    ,

    105

    –113,24.

    Gartel, A.L. и Щорс К. (

    2003

    ) Механизмы c-myc-опосредованной репрессии транскрипции генов остановки роста.

    Exp. Cell Res.

    ,

    283

    ,

    17

    –21,25.

    Сантони-Ругиу, Э., Дуро, Д., Фаркас, Т., Матиасен, И.С., Яаттела, М., Бартек, Дж. и Лукас, Дж. (

    2002

    ) Активность E2F важна для выживания раковых клеток человека, сверхэкспрессирующих Myc.

    Онкоген

    ,

    21

    ,

    6498

    –6509.26.

    Баудино, Т.А., Маклин, К.Х., Бреннан, Дж., Парганас, Э., Янг, К., Асланян, А., Лиз, Дж. А., Шер, К. Дж., Руссель, М.Ф. и Кливленд, J.L. (

    2003

    ) Myc-опосредованная пролиферация и лимфомагенез, но не апоптоз, подвергаются потере E2f1.

    Мол. Ячейка

    ,

    11

    ,

    905

    –914.27.

    Стивенс, С. и La Thangue, N.B. (

    2003

    ) E2F и контроль клеточного цикла: палка о двух концах.

    Arch. Biochem. Биофиз.

    ,

    412

    ,

    157

    –169,28.

    Огава, Х., Исигуро, К., Гаубац, С., Ливингстон, Д.М. и Накатани Ю. (

    2002

    ) Комплекс с модификаторами хроматина, который занимает E2F- и Myc-чувствительные гены в клетках G 0 .

    Наука

    ,

    296

    ,

    1132

    –1136,29.

    Идзуми, Х., Моландер, К., Пенн, Л.З., Исисаки, А., Коно, К. и Фуна, К. (

    2001

    ) Механизм репрессии транскрипции c-Myc на бета-рецепторе PDGF.

    J. Cell. Sci.

    ,

    114

    ,

    1533

    –1544.30.

    Мао Д.Ю., Барсайт-Лавджой Д., Хо К.С., Уотсон Д.Д., Стоянова А. и Пенн, Л.З. (

    2004

    ) Связывание промотора и репрессия PDGFRB с помощью c-Myc являются отдельными видами деятельности.

    Nucleic Acids Res.

    ,

    32

    ,

    3462

    –3468,31.

    Баудино, Т.А., Маккей, К., Пендевиль-Самейн, Х., Нильссон, Д.А., Маклин, К.Х., Уайт, Э.Л., Дэвис, А.С., Иле, Дж. и Кливленд, J.L. (

    2002

    ) c-Myc необходим для васкулогенеза и ангиогенеза во время развития и прогрессирования опухоли.

    Genes Dev.

    ,

    16

    ,

    2530

    –2543.

    Заметки автора

    Лаборатория генетических исследований Дэвида и Инес Майерс, Департамент генетики человека, Медицинская школа Саклера, 1 Школа компьютерных наук, Тель-Авивский университет, Израиль, 2 Отделение гематологии, Департамент медицины и 3 Комплексный онкологический центр Сиднея Киммеля, Университет Джона Хопкинса Школа медицины, Балтимор, Мэриленд 21212 США

    Nucleic Acids Research, Vol.32 No. 17 © Oxford University Press, 2004; все права защищены

    Страница не найдена | Центр системной биологии Сан-Диего

    Весенние участки и пинты 2019 г.

    Среда, 29 мая 2019 г., 16:00 – 20:00

    Tap Room в Rock Bottom La Jolla 8980 La Jolla Village Dr, La Jolla, CA

    Программа SDCSB «Plots n Pints» включает короткие выступления аспирантов и докторантов из лабораторий по всему центру.В отдельной комнате наверху в Rock Bottom будет много еды и времени, чтобы поговорить о новых и старых проектах как до, так и после переговоров. Есть даже бильярдный стол.

    График

    4: 00Добро пожаловать и счастливый час…

    Подробнее →

    5-й ежегодный симпозиум “Взаимодействие” хозяин-патоген “: от цепей к системам

    Организатор: Консорциум FluOMICs

    При поддержке Программного проекта по изучению врожденных иммунных ответов и вакцин против опухолево-ассоциированных герпесвирусов (P01 CA177322)

    Зарегистрируйтесь здесь

    Выяснение молекулярных механизмов, управляющих взаимодействиями хозяин-патоген, является предметом интенсивных исследований в области инфекционных заболеваний.Национальные и местные лидеры мнений обсудят существующие пробелы в нашем понимании того, как патогенам удается уклоняться от иммунного надзора за хозяином и вызывать острые и хронические инфекционные состояния.

    5-я ежегодная конференция по системной биологии и патогену-хозяину…

    Подробнее →

    Первый ежегодный семинар по системной биологии инфекционных болезней

    Осенние графики 2018 в пинтах

    Среда, 14 ноября 2018 г.


    16:00 – 20:00

    «Tap Room» в Rock Bottom La Jolla


    8980 La Jolla Village Dr, La Jolla, CA

    «Plots n Pints» будет включать короткие выступления аспирантов и докторантов из лабораторий SDCSB.Мы забронировали отдельную комнату наверху в Rock Bottom, где у нас будет много еды, пива и время поболтать. С шестью ораторами тоже будет много науки.

    График

    4:00
    Добро пожаловать и счастливый час

    5:00
    Хуан Карлос Хадо Родригес (научный сотрудник, Элизабет Винзелер…

    Подробнее →

    Сетевая биология факторов транскрипции

    Бинг Рен и Крис Гласс и его коллеги охарактеризовали большую панель эпигенетических характеристик, паттернов связывания факторов транскрипции и уровней экспрессии мРНК, среди прочего, в макрофагах пяти линий мышей.Изучая эффекты генетических вариаций, авторы определили сложную сеть факторов транскрипции, управляющих дифференцировкой и реакциями окружающей среды.

    Прочитать в ячейке

    Подробнее →

    СИМПОЗИУМ ПО СОЗДАНИЮ ЯЧЕЙКИ 2018

    29 октября 2018 г.


    8:00 – 18:00

    Sanford Consortium for Regenerative Medicine, Roth Auditorium


    2880 Torrey Pines Scenic Dr, La Jolla, CA

    Размещено в рамках инициативы «Карта раковых клеток»

    Симпозиум по клеточному картированию 2018 будет посвящен картированию клеток, поскольку оно связано с раком, психическими расстройствами, инфекционными заболеваниями и развитием технологий.Основной мотивацией этого симпозиума является осознание того, что, хотя многое было получено в результате крупных проектов по секвенированию генома, теперь необходимо приложить усилия для извлечения механистического понимания из этих данных. Эти…

    Подробнее →

    Учебное пособие по Cytoscape для начинающих

    5 июня 2018 г., вторник

    9:30 – 12:30

    Калифорнийский университет в Сан-Диего, Центр биомедицинских исследований II, комната 3A04

    Организатор Барри Демчак, главный архитектор Cytoscape

    При дополнительной финансовой поддержке Flu-OMICS

    Зарегистрируйтесь здесь

    Cytoscape – самая популярная программа для анализа и визуализации молекулярных сетей и биологических путей.Cytoscape имеет множество мощных функций для интеграции этих сетей с аннотациями, профилями экспрессии генов и другими данными о состоянии.

    В этой клинике для начинающих команда разработчиков Cytoscape предоставит практические инструкции и рекомендации по использованию Cytoscape. Участники…

    Подробнее →

    Совещание по системам для синтеза

    Весна 2018


    Четверг, 17 мая 2018 г.
    14:00 – 18:00, включая «счастливый час»

    Калифорнийский университет в Сан-Диего, Медицинское образование и телемедицина (MET), комната 141

    Ежеквартальное собрание систем-к-синтезу SDCSB («Spring S2S») будет включать короткие доклады и плакаты аспирантов и докторантов из лабораторий SDCSB, за которыми последует «счастливый час».Ожидается, что в нем примут участие все преподаватели и стажеры – аспиранты, докторанты, ученые и сотрудники, работающие над проектами, связанными с SDCSB.

    Встреча открыта для публики, но количество мест ограничено…

    Подробнее →

    Biofilms Coordinate Competition vs Sharing

    Бактериальные биопленки растут колебательно, причем остановка и запуск контролируется недавно обнаруженными электрическими сигналами. Лаборатория Suel теперь обнаружила, что пары бактериальных биопленок координируют свой рост в зависимости от условий окружающей среды.Когда количество питательных веществ ограничено, биопленки колеблются в противофазе, так что одновременно растет только одна. Когда питательных веществ много, биопленки растут синхронно.

    Подробнее →

    4-й ежегодный симпозиум «Взаимодействие между хозяевами и патогенами: от контуров к системам»

    вторник, 6 февраля 2018 г. с 8:30 до 19:00

    Аудитория Roth в Сэнфордском консорциуме регенеративной медицины

    2880 Torrey Pines Science Drive, La Jolla, CA

    Участие БЕСПЛАТНОЕ, но регистрация обязательна для всех участников.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    EGR-1
    .
    EGR-1 Rand1
    .
    EGR-1 Rand2
    .
    EGR-1 Rand3
    .
    EGR-1 Rand4
    .
    EGR-1 Rand5
    .
    Оценка обогащения 4,5 × 10 −7 0,17 0,28 0,25 0,088 0,0034